[發(fā)明專利]一種基于多重PCR技術(shù)檢測不同新冠病毒突變株的引物探針組、檢測試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210088334.3
• 申請日: 2022-01-26
• 公開（公告）號: CN114107572B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 盧曉丹;李烈軍;石琳;肖新?lián)Q;陳燦鈿;吳鈺熙
• 申請（專利權(quán)）人: 潮州凱普生物化學(xué)有限公司;廣東凱普生物科技股份有限公司;廣州凱普醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 薛紅凡

本發(fā)明提供了一種基于多重PCR技術(shù)檢測不同新冠病毒突變株的引物探針組、檢測試劑盒及其應(yīng)用，屬于病毒檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明下載14種新冠病毒突變株序列，確定有檢測意義的新冠病毒S蛋白突變位點和保守序列，設(shè)計多重擴(kuò)增引物，經(jīng)單管多重PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物與探針雜交，根據(jù)新冠病毒保守序列檢測結(jié)果判斷被檢樣本是否含有新型冠狀病毒檢測，根據(jù)S蛋白突變位點檢測結(jié)果判斷為新型冠狀病毒突變株。本發(fā)明檢測范圍廣、特異性強(qiáng)、檢測靈敏度高、抗干擾能力強(qiáng)，且能有效評估受檢者感染的SARS?CoV?2的傳播性、致病性以及是否對疫苗有免疫逃逸，也有助于分析研究SARS?CoV?2的變異規(guī)律，啟發(fā)控制流行和預(yù)防再流行的新思路。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于病毒檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于多重PCR技術(shù)檢測不同新冠病毒突變株的引物探針組、檢測試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

新型冠狀病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）是單股正鏈RNA病毒，直徑60~140 nm，該病毒基因組約由29903個核苷酸構(gòu)成，編碼4種結(jié)構(gòu)蛋白：核蛋白（nucleocapsid，N）、包膜（envelop，E）、基質(zhì)蛋白（membrane，M）、刺突蛋白（spike，S），以及RNA依賴性RNA聚合酶（RNAdependent DNA polymerase，RdRp）。 S蛋白是重要的結(jié)構(gòu)蛋白，其主要功能是通過受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域（receptorbinding domain，RBD）、N端結(jié)構(gòu)域（N-Terminal RNAbinding domain，NTD）促進(jìn)病毒包膜與宿主細(xì)胞的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2（angiotensin converting enzyme 2，ACE2）結(jié)合，使宿主細(xì)胞和病毒融合。由于ACE2在廣泛部位和器官（如呼吸道、心血管、胃腸道、腎臟等）高度表達(dá)。SARS-CoV-2 變異，尤其是S蛋白上的特定位點的突變，不僅能影響病毒與人體細(xì)胞的親和力，改變病毒的傳染性和致病性，S蛋白作為誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞和體液免疫的重要成分還可影響機(jī)體免疫應(yīng)答、疫苗的抗體轉(zhuǎn)化和單克隆抗體的中和作用。目前指定的VOCs有Alpha、Beta、Gamma、Delta、Omicron變異株；VOIs有Lambda和Mu。