[發明專利]一株分泌撲草凈單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其應用

有效

• 申請號: 202210087710.7
• 申請日: 2022-01-25
• 公開（公告）號: CN114395534B
• 公開（公告）日: 2023-08-11
• 發明（設計）人: 胥傳來;郭鑫;匡華;徐麗廣;孫茂忠;吳曉玲;劉麗強;郝昌龍;宋珊珊;胡擁明;郭玲玲;胥欣欣;倪萍;畢雪威;郭鵬飛
• 申請（專利權）人: 無錫迪騰敏生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/44;G01N33/53;G01N33/558;G01N33/577
• 代理公司: 無錫承果知識產權代理有限公司 32373
• 代理人: 劉清麗

本發明公開了食品安全免疫檢測領域的一株分泌撲草凈單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其應用。該分泌撲草凈單克隆抗體的雜交瘤細胞株CPZ，保藏編號為CGMCC?NO.45022，分泌產生的撲草凈單克隆抗體具有較好親和力、較高的特異性和較高靈敏度(IC50值為0.65ng/mL)，可用于制備脫落酸的免疫檢測試劑盒以及膠體金試紙條，建立撲草凈的免疫學檢測方法，為食品中撲草凈殘留的檢測提供有力的檢測方法。

技術領域

本發明屬于食品安全免疫檢測領域，具體涉及一株分泌撲草凈單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其應用。

背景技術

撲草凈為水旱地兩用的選擇性均三嗪類除草劑，具有內吸傳導作用。可從根部吸收，也可從莖葉滲入植株，運輸至綠色葉片內抑制光合作用，雜草失綠干枯死亡。持效期長達20～70d，適用于水稻、小麥、大豆、棉花、甘蔗、果樹、蔬菜等作物，防除一年生闊葉雜草、禾草、莎草及某些多年生雜草，如馬唐、狗尾草、稗草、鴨舌草、節節草、看麥娘等及多年生眼子菜、牛毛草等。

目前，撲草凈檢測方法主要為儀器檢測，常用的有高效液相色譜法和氣相色譜-質譜法等。盡管這些基于色譜的方法具有很高的靈敏度和特異性，但存在一些缺點，例如需要徹底的樣品凈化，高溶劑消耗，昂貴的設備以及熟練的技術人員。因此，需要開發一種快速，簡單的分析撲草凈殘留物的方法。

酶聯免疫法(ELISA)是一種極為高效、敏感、快速的檢測方法，檢測時對樣本的前處理簡單、純化步驟少、分析容量大、檢測成本低而且操作簡便，適用于大量樣本的現場快速檢測，因此得到了廣泛應用。而使用酶聯免疫法檢測撲草凈的前提是得到對撲草凈具有高特異性和高靈敏度的單克隆抗體，因此，找到一種制備對撲草凈具有高特異性和高靈敏度的單克隆抗體的方法十分關鍵。發明人嘗試通過雜交瘤細胞制備撲草凈單克隆抗體，但在制備能分泌撲草凈單克隆抗體的雜交瘤細胞株的過程中，如何制備撲草凈半抗原和撲草凈完全抗原、如何使小鼠產生強免疫，還需進一步的研究；如何使得制備出的雜交瘤細胞株能夠成功分泌出撲草凈單克隆抗體，還需進一步的研究；如何使得分泌出的撲草凈單克隆抗體特異性強、靈敏度高，也還需進一步的研究。

發明內容

為了解決現有技術中的不足，本發明的目的在于提供一株分泌撲草凈單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其應用。

本發明第一方面提供一株分泌撲草凈單克隆抗體的雜交瘤細胞株CPZ，其保藏編號為CGMCC?NO.45022。

本發明第二方面提供一種撲草凈單克隆抗體，其由所述的雜交瘤細胞株CPZ分泌產生。

本發明第三方面提供所述雜交瘤細胞株CPZ或所述撲草凈單克隆抗體在撲草凈檢測中的應用、在制備撲草凈免疫檢測試劑盒中的應用或在制備撲草凈檢測膠體金試紙條中的應用。

本發明第四方面提供一種撲草凈免疫檢測試劑盒，其包含所述雜交瘤細胞株CPZ或所述撲草凈單克隆抗體。

進一步地，所述撲草凈免疫檢測試劑盒還包含酶標板、撲草凈包被抗原、撲草凈標準液、酶標記二抗和底物反應液。

進一步地，所述撲草凈包被抗原具有如下所示結構：

本發明第五方面提供一種撲草凈檢測膠體金試紙條，其包括樣品墊、膠體金結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述硝酸纖維素膜上依次設有檢測線和質控線，所述膠體金結合墊上包被所述撲草凈單克隆抗體。

進一步地，所述檢測線由撲草凈包被抗原印制得到。

進一步地，所述撲草凈包被抗原具有如下所示結構：

本發明第六方面提供所述撲草凈免疫檢測試劑盒或所述撲草凈檢測膠體金試紙條在撲草凈檢測中的應用。

本發明分泌撲草凈單克隆抗體的雜交瘤細胞株的制備方法，包含如下步驟：