[發明專利]以氨磷汀為底物利用ATRP信號放大策略檢測堿性磷酸酶的電化學試劑盒及使用方法

有效

• 申請號: 202210087689.0
• 申請日: 2022-01-25
• 公開（公告）號: CN114410735B
• 公開（公告）日: 2023-10-27
• 發明（設計）人: 程迪;張亞萍;盧靜;李培培;時鑫恒;劉溫馨;劉艷菊
• 申請（專利權）人: 河南中醫藥大學
• 主分類號: C12Q1/42
• 分類號: C12Q1/42;G01N27/327;G01N27/49
• 代理公司: 鄭州中鼎萬策專利代理事務所(普通合伙) 41179
• 代理人: 徐文婷

1.一種以氨磷汀為底物利用ATRP信號放大策略檢測堿性磷酸酶的電化學試劑盒，其特征在于，包括：金電極、BPAA、EDC、NHS、氨磷汀、CuBr₂/Me₆TREN、FMMA、AA。

2.根據權利要求1所述電化學試劑盒，其特征在于，還包括DMSO、超純水、Tris-HCl緩沖溶液、LiClO₄。

3.根據權利要求1所述電化學試劑盒，其特征在于，使用時，BPAA配制為1mM，EDC配制為1mM，NHS配制為1mM，氨磷汀配制為2mM；CuBr₂/Me₆TREN溶液中CuBr₂的濃度為10mM，Me₆TREN的濃度為12mM，FMMA溶液濃度為10mM，AA溶液濃度為20mM，LiClO₄溶液濃度為1M。

4.一種如權利要求1所述試劑盒的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)EDC、NHS活化BPAA羧基

將BPAA、EDC及NHS加入DMSO中，反應；

(2)氨磷汀的水解

將氨磷汀溶液與待檢測樣品溶液混合，反應；

(3)金電極的修飾和ATRP反應

①金電極的修飾：將步驟(2)的反應液滴加在金電極表面，反應，洗滌，吹干；

②BPAA修飾：將修飾電極浸泡在步驟(1)的反應液中，反應，洗滌，吹干；

③ATRP反應：依次向H₂O中加入CuBr₂/Me₆TREN溶液、FMMA溶液、AA溶液，混合均勻后，將電極浸泡在混合溶液中，反應；

(4)SWV檢測

將步驟(3)所得電極浸入LiClO₄溶液中，進行方波伏安法電化學測量。

5.根據權利要求4所述檢測堿性磷酸酶的方法，其特征在于，氨磷汀溶液的配制方法為：將氨磷汀加入Tris-HCl緩沖溶液中，使其濃度為2mM，Tris-HCl緩沖溶液的pH為9.0，氨磷汀溶液和待檢測樣品溶液的體積比為1:1。

6.根據權利要求4所述檢測堿性磷酸酶的方法，其特征在于，金電極先進行預處理，預處理方法為：

①將金電極分別用無水乙醇和超純水超聲洗滌30s；

②分別用0.3μm、0.05μm的氧化鋁拋光粉打磨3～5min；

③分別用無水乙醇和超純水超聲洗滌30s；

④用水虎魚酸浸泡15min；

⑤分別用無水乙醇和超純水超聲洗滌30s；

⑥電極浸泡在0.5M硫酸溶液中，設置電位為-0.3～1.5V，掃描速率為0.2V/s，設置掃描段數為40，直至得到可重復的循環伏安圖；

⑦用超純水超聲洗滌，再用氮氣吹干備用。

7.根據權利要求4所述檢測堿性磷酸酶的方法，其特征在于，DMSO中BPAA濃度為1mM，EDC濃度為1mM，NHS濃度為1mM，CuBr₂/Me₆TREN中CuBr₂的濃度為10mM，Me₆TREN的濃度為12mM，FMMA溶液濃度為10mM，AA溶液濃度為20mM，H₂O、CuBr₂/Me₆TREN溶液、FMMA溶液、AA溶液的體積比為7:1:1:1，LiClO₄溶液濃度為1M。

8.根據權利要求4所述檢測堿性磷酸酶的方法，其特征在于，方波伏安法電化學測量的掃描范圍為0～0.6V電位。

9.根據權利要求4所述檢測堿性磷酸酶的方法，其特征在于，步驟(1)中反應溫度為37℃，時間為4～8h；步驟(2)和(3)中反應溫度為37℃，時間為1～2h。

10.一種如權利要求1所述試劑盒在檢測堿性磷酸酶中的應用。