[發明專利]一種熒光素酶凍干粉制備工藝在審

申請號：	202210086799.5	申請日：	2022-01-25
公開（公告）號：	CN114480313A	公開（公告）日：	2022-05-13
發明（設計）人：	馬振橋;丁海平;李坤	申請（專利權）人：	合肥巔峰生物科技有限公司
主分類號：	C12N9/02	分類號：	C12N9/02;C12N9/96
代理公司：	合肥四閱專利代理事務所(普通合伙) 34182	代理人：	李蘇
地址：	230000 安徽省合肥市***	國省代碼：	安徽;34
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種熒光素酶凍干粉制備工藝
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【說明書】：

本發明提供了一種熒光素酶凍干粉制備工藝，包括以下步驟：S1、對蟲熒光素酶溶液使用親和層析方法進行純化；S2、加入相對于蟲熒光素酶溶液體積為5?50％蟲熒光素酶凍干保存液；S3、進行凍干程序：首先使得步驟S2中混合溶液在5℃條件下進行預凍2?3h，預凍后在真空狀態在進行凍干，所述凍干的溫度曲線為：在?30～?25℃保持4?5h，在?18～?10℃保持1?3h，在0～10℃保持6～8h；結束后凍干完成。本發明提供的重組蟲熒光素酶K的凍干工藝操作簡單、成本低廉，制備得到的蟲熒光素酶干粉熱穩定性以及保存穩定性優異。

技術領域

本發明涉及酶的凍干技術領域，具體涉及一種熒光素酶凍干粉制備工藝。

背景技術

大部分螢火蟲熒光素酶由單一的多肽鏈構成，而且不同的螢火蟲提取出來的螢火蟲熒光素酶的相對分子量和結構各有些差異，從北美螢火蟲中提取出來的熒光素酶的相對分子質量約為62kD，是由551個氨基酸殘基構成的含有大量的疏水氨基酸殘基的單一多肽鏈。蟲熒光素酶能有效的催化由三膦酸腺苷(ATP)，熒光素，氧氣和Mg²⁺組成的反應，同時將生物能轉化成光能發出熒光。影響熒光素酶催化發光的因素很多，包括ATP，熒光素，氧氣，鎂離子的濃度，pH以及反應溫度等。目前應用最廣泛的是北美螢火蟲熒光素酶，其最適反應溫度為37℃，最適反應pH為7.8。雖然熒光素酶催化生物發光技術在食品，醫學，農業，生命科學等領域有廣闊的應用前景，但熒光素酶對溫度及凍融等因素極為敏感，使用前需分裝保存在-20℃冰箱中，否則極易失活。由于熒光素酶的不穩定性，因此很大程度的制約了其產品的開發和應用。

蟲熒光素酶的特點是熱穩定性差，受熱極易失去活性，這將極大的限制其應用性，也極大的降低了其商業價值。通過對其凍干和凍干配方的調整，得到了熱穩定性優異的蟲熒光素酶凍干粉，使其應用和商業價值得到了進一步提升。針對上述情況，本申請提出了一種熒光素酶凍干粉制備工藝。

發明內容

本發明的目的是提供一種熒光素酶凍干粉制備工藝，制備得到的蟲熒光素酶干粉的熱穩定性以及保存穩定性優異。

本發明采用以下技術方案解決上述技術問題的：

一種熒光素酶凍干粉制備工藝，包括以下步驟：

S1、對蟲熒光素酶溶液使用親和層析方法進行純化；

S2、加入相對于蟲熒光素酶溶液體積為5-50％蟲熒光素酶凍干保存液；

S3、進行凍干程序：首先使得步驟S2中混合溶液在5℃條件下進行預凍2-3h，預凍后在真空狀態在進行凍干，所述凍干的溫度曲線為：在-30～-25℃保持4-5h，在-18～-10℃保持1-3h，在0～10℃保持6～8h；結束后凍干完成。

進一步地，所述凍干保存液包括葡萄糖、海藻糖、甘露醇、BSA、氯化鈉和緩沖液中的一種或幾種。

進一步地，所述葡萄糖、海藻糖、甘露醇、BSA、氯化鈉和緩沖液的體積比為1-10:1-10：5-15:1-5：1-5:0.1-1。

進一步地，所述葡萄糖、海藻糖、甘露醇、BSA、氯化鈉和緩沖液的體積比為4:5:8:3:1:0.1。

進一步地，所述緩沖液為磷酸氫二鈉。