[發(fā)明專利]一種運用亞致死光催化調(diào)控耐藥基因接合轉(zhuǎn)移頻率的方法及其應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202210085908.1 | 申請日： | 2022-01-25 |
| 公開（公告）號： | CN114350740A | 公開（公告）日： | 2022-04-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李桂英;吉昊;安太成;蔡儀威 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣東工業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/10 | 分類號： | C12Q1/10;C12Q1/06;C12N15/03 |
| 代理公司： | 廣東廣信君達律師事務(wù)所 44329 | 代理人： | 彭玉婷 |
| 地址： | 510062 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 運用 致死 光催化 調(diào)控 耐藥 基因 接合 轉(zhuǎn)移 頻率 方法 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種運用亞致死光催化調(diào)控耐藥基因接合轉(zhuǎn)移頻率的方法，包括以下步驟：
S1.將保存于-80℃的供體菌接種到含有對應(yīng)抗生素的肉湯中富集培養(yǎng)，在20～40℃下培養(yǎng)1～18h，得到活化的供體菌；
S2.將保存于-80℃的受體菌耐鏈霉素的大腸桿菌接種到含有對應(yīng)抗生素的肉湯中富集培養(yǎng)，在37℃下培養(yǎng)1～18h，得到活化的受體菌；
S3.將活化的供體菌與活化的受體菌離心后去除上清液得到菌體，并用1xPBS緩沖液洗滌菌體，再加入0.9％的NaCl溶液重懸菌體，分別得到供體菌液和受體菌液；
S4.在供體菌液和受體菌液中分別加入納米TiO2催化劑，然后放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中控制溫度，并使用波長為365nm的LED紫外燈進行光催化調(diào)控；
S5.將調(diào)控完成的供體菌溶液和受體菌液混合，放置在20～40℃的恒溫搖床中震蕩培養(yǎng)，得到接合轉(zhuǎn)移菌液；
S6.將接合轉(zhuǎn)移菌液稀釋涂布在雙抗板上，并將受體菌耐鏈霉素的大腸桿菌液稀釋涂布在含有鏈霉素的平板上，確定接合轉(zhuǎn)移菌液中接合子的濃度以及受體菌液中受體菌的濃度，通過接合子濃度和受體菌濃度計算接合頻率，實現(xiàn)調(diào)控耐藥基因接合轉(zhuǎn)移頻率。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的運用亞致死光催化技術(shù)調(diào)控耐藥基因接合轉(zhuǎn)移頻率的方法，其特征在于，步驟S1中所述的供體菌為頭孢類耐藥菌、多粘菌素類耐藥菌、四環(huán)素類耐藥菌、利福平類耐藥菌、磺胺類耐藥菌、喹諾酮類耐藥菌中的一種以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的運用亞致死光催化技術(shù)調(diào)控耐藥基因接合轉(zhuǎn)移頻率的方法，其特征在于，所述頭孢類耐藥菌為含有耐頭孢類基因CTX的E.coli DH5α，所述多粘菌素類耐藥菌為含有耐多粘菌素類基因MCR的E.coli DH5α，所述四環(huán)素類耐藥菌為含有耐四環(huán)素類基因TET的E.coli DH5α，所述利福平類耐藥菌為含有耐利福平類基因AMP的E.coli DH5α，所述磺胺類耐藥菌為含有耐磺胺類基因SMZ的E.coli DH5α，所述喹諾酮類耐藥菌為含有耐喹諾酮類基因OFX的E.coli DH5α。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的運用亞致死光催化技術(shù)調(diào)控耐藥基因接合轉(zhuǎn)移頻率的方法，其特征在于，步驟S3中所述的供體菌液或受體菌液的濃度均為105～109cfu/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的運用亞致死光催化技術(shù)調(diào)控耐藥基因接合轉(zhuǎn)移頻率的方法，其特征在于，步驟S3中所述離心的速率為6000～8000rpm，所述離心的時間為1～3min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的運用亞致死光催化技術(shù)調(diào)控耐藥基因調(diào)控接合轉(zhuǎn)移頻率的方法，其特征在于，步驟S4中所述的納米TiO2催化劑在供體菌液和受體菌液中的濃度均為1～100mg/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的運用亞致死光催化技術(shù)調(diào)控耐藥基因接合轉(zhuǎn)移頻率的方法，其特征在于，步驟S4中所述的LED紫外燈的光強為1～100mw/cm2；所述的光催化調(diào)控的時間為1～120min。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的運用亞致死光催化技術(shù)調(diào)控耐藥基因接合轉(zhuǎn)移頻率的方法，其特征在于，步驟S5中所述的供體菌液和受體菌液的體積比為(0.25～4)：1。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的運用亞致死光催化技術(shù)調(diào)控耐藥基因接合轉(zhuǎn)移頻率的方法，其特征在于，步驟S5中所述的震蕩培養(yǎng)的時間為1～16h，所述搖床的搖速為50～250rpm。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項所述的運用亞致死光催化技術(shù)調(diào)控耐藥基因接合轉(zhuǎn)移頻率的方法在環(huán)境微生物或水消毒領(lǐng)域中的應(yīng)用。
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