[發明專利]一種篩選抗衰老活性配體的方法

在審

• 申請號: 202210085368.7
• 申請日: 2022-01-25
• 公開（公告）號: CN114594177A
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 郭明全;徐勇兵;陳桂林
• 申請（專利權）人: 中國科學院武漢植物園
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 成都環泰專利代理事務所(特殊普通合伙) 51242
• 代理人: 蒙思宇;李斌

1.一種篩選抗衰老活性配體的方法，其特征是：將辣木葉提取物與靶酶親和吸附后高速離心去除未吸附的成分；然后加入溶劑解吸附，對解吸附后的溶液進行色譜-質譜儀器分析，采集相應的色譜峰，通過色譜峰面積計算得到辣木葉中抗衰老活性配體。

2.根據權利要求1所述的一種篩選抗衰老活性配體的方法，其特征是：所述辣木葉中抗衰老活性配體為3-咖啡酰奎寧酸和4-咖啡酰奎寧酸。

3.根據權利要求1所述的一種篩選抗衰老活性配體的方法，其特征是：包括以下步驟：(1)酶促反應緩沖液的配制；

(2)待測樣品的配制；稱取適量辣木葉提取物，使用酶促反應緩沖液充分溶解，得到待測樣品溶液；

(3)待測樣品溶液與靶酶結合反應；分別吸取適量的待測樣品溶液與彈性蛋白酶、膠原酶和透明質酸酶于離心管中，混合均勻后恒溫下孵育；孵育結束后，將混合液轉移至超濾離心管中高速離心；加入酶促反應緩沖液洗脫；再向超濾管內截留配體加入適量有機溶劑，洗脫與靶酶結合的成分，收集洗脫液得實驗組溶液；另取滅活靶酶作為對照組，采用上述相同方法處理得到對照組溶液；

(4)實驗組溶液與對照組溶液儀器分析采集色譜峰信息；取適量上述待測樣品溶液、實驗組溶液、對照組溶液干燥后加入有機溶劑溶解后進行色譜-質譜分析，得到各組分的色譜峰；

(5)計算富集率得到辣木葉抗衰老活性配體；根據上述色譜峰計算富集率，得到辣木葉中抗衰老活性配體。

4.根據權利要求3所述的一種篩選抗衰老活性配體的方法，其特征是：所述步驟(1)中，酶促反應緩沖液為0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液或0.05mol/L的三羥甲基氨基甲烷緩沖液。

5.根據權利要求3所述的一種篩選抗衰老活性配體的方法，其特征是：所述步驟(2)中，取適量辣木葉提取物，使用酶促反應緩沖液將其充分溶解，得到濃度為8.0mg/mL辣木葉待測樣品溶液。

6.根據權利要求3所述的一種篩選抗衰老活性配體的方法，其特征是：所述步驟(3)中，分別取100μL待測樣品溶液、20μL的10U彈性蛋白酶、40μL的2U膠原酶、40μL的60U透明質酸酶于0.2mL的離心管中混勻，37℃下恒溫孵育40min，孵育結束后，將混合液轉移至截留分子量為10KD的超濾離心管中，以10000rpm/min的轉數離心10分鐘，然后加入200μL上述酶促緩沖溶液洗去未與這三種靶酶結合的成分，并在10000rpm/min下再次離心10分鐘，棄去濾液，重復上述步驟2次；再向超濾管中加入200μL有機溶劑，室溫下靜置10分鐘，10000rpm/min下離心10分鐘，洗脫與靶酶結合的成分，重復上述步驟2次，收集合并濾液得到實驗組溶液；對照組采用沸水中加熱失活的彈性蛋白酶、膠原酶和透明質酸酶，其余步驟與實驗組相同，得到對照組溶液。

7.根據權利要求2所述的一種篩選抗衰老活性配體的方法，其特征是：所述辣木葉中抗衰老活性配體3-咖啡酰奎寧酸和4-咖啡酰奎寧酸可應用于制備綠原酸類化合物。

8.根據權利要求2所述的一種篩選抗衰老活性配體的方法，其特征是：所述辣木葉中的3-咖啡酰奎寧酸和4-咖啡酰奎寧酸用于治療、預防代謝綜合征、糖尿病及其并發癥、心血管疾病、老年癡呆癥、高血脂癥的藥物配體。