[發(fā)明專利]一種大黃魚胚胎細胞系YCE1及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210076955.X
• 申請日: 2022-01-24
• 公開（公告）號: CN114395524B
• 公開（公告）日: 2023-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄭在予;池洪樹;龔暉
• 申請（專利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073;C12N7/00;C12N15/85;C12N5/10;C12R1/93;C12R1/91
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 蘇士瑩

本發(fā)明提供了一種大黃魚胚胎細胞系YCE1及其應(yīng)用，涉及細胞系技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所述細胞系YCE1的保藏編號為CCTCC?No:C2021236。本發(fā)明所述細胞系YCE1的培養(yǎng)方法簡便經(jīng)濟，除胎牛血清外無需添加特殊營養(yǎng)因子，在病毒學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)、生理學(xué)、毒理學(xué)等領(lǐng)域都有良好的應(yīng)用前景。本發(fā)明還提供了上述細胞系YCE1的應(yīng)用，可作為病毒宿主細胞用以構(gòu)建病毒侵染模型，也可用于構(gòu)建外源基因表達模型。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細胞系技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種大黃魚胚胎細胞系YCE1及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

自1962年，第一株真骨魚類永久性細胞系——虹鱒性腺細胞系RTG-2建立以來，截至2020年，已公開發(fā)表的魚類細胞系共計783株，分屬44個科。最近10年中，70％以上的新建魚類細胞系報導(dǎo)來自亞洲，其中約28％來自中國，說明以中國為首的亞洲地區(qū)已經(jīng)成為世界魚類細胞培養(yǎng)技術(shù)研究的中心。魚類細胞系培養(yǎng)技術(shù)在病原學(xué)、免疫學(xué)、細胞生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、生理學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)、遺傳學(xué)和種質(zhì)資源保護等領(lǐng)域都得到廣泛的應(yīng)用，在病毒學(xué)研究中的地位尤其關(guān)鍵：病毒在細胞體系中的培養(yǎng)和分離被視為病原鑒定、特性分析和機制研究的不可或缺的基礎(chǔ)和起點。

大黃魚(Larimichthys?crocea)，屬鱸形目(Perciformes)、石首魚科(Sciaenidae)、黃魚屬(Larimichthys)，其體色金黃，肉質(zhì)潔白細膩而味美，具有豐富的營養(yǎng)價值，是我國傳統(tǒng)“四大海產(chǎn)”之首，有“國魚”的美譽。在閩、浙等地區(qū)，成規(guī)模捕撈大黃魚已有數(shù)百年歷史。

雖然大黃魚已經(jīng)實現(xiàn)了大規(guī)模的人工海水網(wǎng)箱養(yǎng)殖，但是由于網(wǎng)箱養(yǎng)殖業(yè)普遍存在布局不善、密度過高、水質(zhì)惡化、濫用藥物、近親繁殖等現(xiàn)象，導(dǎo)致養(yǎng)殖大黃魚的病害侵襲和種質(zhì)退化狀況相當(dāng)嚴(yán)重。近年來每年大黃魚產(chǎn)業(yè)因病害造成的損失數(shù)以億計，同時影響了養(yǎng)殖區(qū)所在海域的環(huán)境治理和整個行業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。大黃魚養(yǎng)殖業(yè)的常見病害中，以病毒性疾病研究基礎(chǔ)最為薄弱，危害大而防控困難。目前大黃魚病毒研究的相關(guān)報道很少，究其原因，正是由于具備病毒敏感性的宿主細胞系模型的缺乏，致使大黃魚病毒病的發(fā)病機制研究和疫苗開發(fā)在起步階段即遭遇困境。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種大黃魚胚胎細胞系YCE1及其應(yīng)用，所述細胞系YCE1具備病毒敏感性和已知生物學(xué)特性，能夠長期、穩(wěn)定地大量獲取，對于大黃魚的病害防控和種質(zhì)保護研究有重要的意義，更有益于大黃魚養(yǎng)殖業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展，以及在可期的未來實現(xiàn)野生種群的復(fù)壯。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種大黃魚胚胎細胞系(Larimichthys?crocea)YCE1，所述細胞系YCE1已完成保藏，保藏編號為CCTCC?No：C2021236。

本發(fā)明還提供了上述細胞系YCE1在構(gòu)建病毒侵染模型中的應(yīng)用。

優(yōu)選的，所述病毒侵染模型以所述細胞系YCE1為宿主細胞，以侵染大黃魚的病毒為侵染病毒。

優(yōu)選的，所述病毒包括大黃魚虹彩病毒。

本發(fā)明還提供了上述細胞系YCE1在構(gòu)建外源基因表達模型中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了一種外源基因表達模型的構(gòu)建方法，包括以下步驟：將上述細胞系YCE1培養(yǎng)成單層細胞，利用攜帶外源基因的重組表達載體轉(zhuǎn)染所述單層細胞，培養(yǎng)后得所述外源基因表達模型。

優(yōu)選的，所述單層細胞的培養(yǎng)方法，包括：將所述細胞系YCE1接種到培養(yǎng)皿中，在26℃條件下培養(yǎng)18～24h，得所述單層細胞；所述細胞系YCE1的接種量為0.8×10⁵～2×10⁵個/皿。

優(yōu)選的，所述攜帶外源基因的重組表達載體的基礎(chǔ)載體包括真核表達載體，所述真核表達載體包括pEGFP-N1。

優(yōu)選的，所述轉(zhuǎn)染的方法包括脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法。