[發(fā)明專利]鑒定罌粟的SNP分子標記及應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210075708.8
• 申請日: 2022-01-22
• 公開（公告）號: CN114292952B
• 公開（公告）日: 2023-05-26
• 發(fā)明（設計）人: 張燕君;王晶;梁瓊;楊路路
• 申請（專利權）人: 中國科學院武漢植物園
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所(普通合伙) 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

本發(fā)明屬于分子鑒定技術領域，公開了鑒定罌粟的SNP分子標記及應用。申請人提供了兩個可單獨進行鑒定的SNP位點，根據特異性SNP位點堿基類型來判斷待測材料是否為罌粟，若待測物種在位點SNP1為G/G純和位點則為罌粟，若為A/A純和位點或C/C純和位點則為罌粟屬其他物種；若待測物種在位點SNP2為C/C純和位點則為罌粟，若為A/A純和位點或A/C雜合位點則為罌粟屬其他物種。與現有技術相比，本發(fā)明不僅操作簡單，而且在降低鑒定成本的基礎上，還有效提高了鑒別的準確性和效率。

技術領域

本發(fā)明涉及分子鑒定技術領域，具體涉及鑒定罌粟的SNP分子標記及應用。

背景技術

罌粟(Papaver?somniferum?L.)為罌粟科(Papaveraceae)罌粟屬(Papaver?L.)一年生草本植物，與大麻、古柯一同被聯合國禁毒公約列為世界三大毒品原植物。罌粟屬約100種,我國有7種，分別為罌粟(P.somniferumL.)、鬼罌粟(PapaverorientaleL.)、虞美人(PapaverrhoeasL.)、黑環(huán)罌粟(PapaverpavoninumFisch.et?Mey.)、野罌粟(Papavernudic?auleL.)、灰毛罌粟(PapavercanescensA.Tolm.)、長白山罌粟(PapaverradicatumRottb.)。罌粟屬植物花型豐富，花色艷麗，常被用作觀賞植物栽培。由于罌粟與同屬植物虞美人、鬼罌粟等在花型、顏色及果實上極為相似，為毒品原植物罌粟的鑒定及相關案件的偵破帶來困難。在法庭科學中，雖可通過化學分析法來鑒定罌粟，但它受到植物生長期的限制，且化學檢測周期長，操作復雜，對儀器設備要求較高等，增加了公安機關對罌粟案件定性與偵破的難度。

近些年，EST-SSR標記得到開發(fā)并應用于罌粟的鑒定。2018年徐小玉等應用自行設計的1對罌粟種屬特異性EST-SSR引物對案件中疑似罌粟籽的檢材進行鑒定，為案件的定性提供了物證依據。2011年，Lee等開發(fā)了1對能夠較好的應用于本土罌粟與其近緣種的鑒的EST-SSR標記引物。2016年，裴黎等人公開了一種罌粟種屬特異性遺傳標記檢測體系，其包含4對鑒定罌粟的引物對組，可同時擴增罌粟4個STR基因座。2018年，楊志云通過4對特異性引物實現了罌粟SSR分子標記鑒定。2019年，本研究團隊開發(fā)了一組包含有3對特異性引物的引物組，可對罌粟及其近緣物種進行有效鑒定。然而，關于單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotide?polymorphisms,SNP)分子標記在罌粟鑒定方面的報道少之又少。

SNP主要是指由于單個核苷酸的變異而引起基因組水平上的DNA序列多態(tài)性。與其它分子標記相比，SNP具有數目多、分布廣、遺傳穩(wěn)定、具有代表性等優(yōu)點，是目前使用較為廣泛的分子標記之一。隨著測序技術的迅猛發(fā)展，罌粟基因組序列得到公布，擴大了SNP分子標記的檢測范圍，為SNP標記在罌粟屬的研究中應用奠定了基礎。由于罌粟在種內存在豐富的遺傳變異，因此罌粟的鑒定既要表現其種間的差異性又要兼顧其種內的保守性。SNP則可以精確到單個核苷酸的識別，通過DNA序列間的細微差異區(qū)分不同個體，除此之外它還具有分析速度快、易建立標準化操作，非常適合物種的鑒定，目前已被廣泛應用到法庭科學實踐中進行個體識別和親子鑒定。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供鑒定罌粟的SNP分子標記。

本發(fā)明的另一個目的是提供SNP分子標記在鑒定罌粟中的應用。該方法在簡易性、高效性的基礎上，提高了毒品原植物罌粟鑒定的準確性。

為了達到上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術方案：

利用GBS技術對收集到的具有形態(tài)差異的罌粟及其近緣物種共十二份植物材料混樣DNA進行測序，通過對測序數據進行嚴格的過濾和比對分析，篩選出了兩個毒品原植物罌粟特異性SNP位點：SNP1和SNP2；

針對SNP1設計的引物為：

SNP1F：gtacgataccctaggcagacattc