[發(fā)明專利]一種鑒定和定量分析抗癌藥物的光譜分析方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210068163.8
• 申請日: 2022-01-20
• 公開（公告）號: CN114414512A
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張嚴(yán)冬;鄒東旭
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳開悅生命科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 北京眾澤信達知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11701
• 代理人: 張艷萍

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥分析技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種簡易的鑒定和定量分析抗癌藥物的光譜分析方法。本發(fā)明通過分析特定抗癌藥物游離堿的化學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)其結(jié)構(gòu)式中含有多個電子共軛芳環(huán)或者芳雜環(huán)，判斷可以利用光譜吸收的方法確定化合物的特征吸收光譜，進而進行化合物的定性和定量分析。由此提供的一種光譜分析方法，僅需采用一般實驗室配備的全波段紫外分光光度計對抗癌藥物進行波長掃描，再利用特征吸收波長處的吸收峰/谷及豐度比值便可準(zhǔn)確、快速的鑒定抗癌藥物，無需特殊的設(shè)備和試劑條件，并可有效區(qū)分與抗癌藥物結(jié)構(gòu)相似的同類化合物，操作簡便，分析所需時間短，對特定抗癌藥物的應(yīng)用研究具有潛在的價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種簡易的鑒定和定量分析抗癌藥物的光譜分析方法，尤其是涉及一種抑制DHX33 RNA解旋酶活性的化合物作為抗癌藥物的鑒定和定量分析方法。

背景技術(shù)

DHX33屬于含有DEAD/H盒的RNA解旋酶蛋白家族。其中DEAD/H代表氨基酸的縮寫Asp-Glu-Ala-Asp/His，這一序列連同其他多個保守性的氨基酸序列，出現(xiàn)在RNA解旋酶家族成員的蛋白序列中，高度參與核酸底物結(jié)合以及ATP水解。雖然這些家族成員共有這些相同的序列，但是每個RNA解旋酶都有各自特定的專一性和獨特的生物功能。人DHX33蛋白含有707個氨基酸，分子量在70kDa左右，具有解旋核酸的功能，它利用ATP水解所釋放的生物能來驅(qū)動改變RNA和蛋白質(zhì)復(fù)合物的構(gòu)象，進而參與多種RNA的代謝活動，具體地，從RNA轉(zhuǎn)錄、剪切、編輯、翻譯到降解等一系列生物過程。DHX33蛋白的功能并不僅僅局限于對RNA分子的修飾，研究表明，除了解旋RNA雙鏈之外，DHX33蛋白也參與到DNA的代謝，可以解開DNA的雙鏈結(jié)構(gòu)，并在基因表達過程中起重要作用。

研究表明，DHX33通過結(jié)合在多種癌癥相關(guān)的基因啟動子，影響了DNA的甲基化狀態(tài)，進而在基因組水平調(diào)控多種癌癥基因的表達和腫瘤發(fā)展相關(guān)的信號通路，對細(xì)胞生長、增殖、遷移、凋亡、糖代謝等多種細(xì)胞活動有至關(guān)重要的作用。此外，發(fā)現(xiàn)DHX33可以感受外來雙鏈RNA分子的侵入，并在細(xì)胞的先天免疫中發(fā)揮重要作用。DHX33作為十分重要的細(xì)胞生長調(diào)控基因，在多種癌癥中高度表達，比如肺癌、淋巴瘤、神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌、肝癌等。多種癌癥的發(fā)生發(fā)展依賴于DHX33蛋白的高度表達。DHX33的遺傳敲除可以顯著抑制RAS癌基因驅(qū)動的肺癌發(fā)生發(fā)展。體內(nèi)和體外實驗證實，抑制DHX33蛋白后，多種癌癥如乳腺癌、結(jié)腸癌、腦膠質(zhì)瘤、淋巴瘤等癌癥的發(fā)生發(fā)展都受到明顯抑制。由于DHX33的蛋白功能依賴于其解旋酶活力，而DHX33的解旋酶活力缺失突變體不具有DHX33蛋白的功能，因而無法替代野生型DHX33基因的功能。

中國專利申請CN112538078A、CN112661754A、CN112898284A、CN113398269A公開了多種能抑制DHX33 RNA解旋酶活性的化合物，并驗證在體外和體內(nèi)均可顯著抑制肝癌細(xì)胞的生長。目前，針對靶向DHX33的抗癌藥物(如中國專利申請CN113616644A公開的化合物D)的分析及鑒定方法少有報道，如果采用液相色譜及質(zhì)譜分離和鑒定，通常需要配備高端設(shè)備，一般的實驗平臺很難達到要求，這也為定量分析和鑒定設(shè)置了不便利的因素。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種簡易的鑒定和定量分析抗癌藥物的光譜分析方法，用以解決現(xiàn)有方法對實驗平臺要求較高、技術(shù)繁瑣且分析成本高的問題。

本發(fā)明的目的及其技術(shù)問題的解決，可以采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)，即采用一般實驗配備的全波段紫外分光光度計進行抗癌藥物的波長掃描，獲得該化合物的特征紫外吸收光譜，然后通過鑒定特征波長處的吸收峰/谷，以及計算吸收峰與吸收峰和/或吸收峰與吸收谷之間吸收豐度的比值進行化合物的定性鑒定。同時，通過繪制不同濃度下的抗癌藥物在特定溶媒中的特征吸收值的標(biāo)準(zhǔn)曲線進行化合物的含量分析。