[發(fā)明專利]一種胰腺癌早期診斷標(biāo)志物及其聯(lián)合篩選方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210064785.3
• 申請(qǐng)日: 2022-01-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114720616A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-07-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王紅霞;俞思薇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市第一人民醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/88
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/88;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 上海元好知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31323
• 代理人: 賈慧琴;包姝晴

1.一種胰腺癌早期診斷標(biāo)志物的聯(lián)合篩選方法，其特征在于，所述的聯(lián)合篩選方法包含以下步驟：

步驟1，分別取胰腺癌病人臨床組織PDAC、與其配對(duì)的正常組織PNT；

步驟2，通過(guò)色譜質(zhì)譜聯(lián)用代謝組學(xué)分析方法，分析鑒定胰腺癌組織和/或血清與正常組織和/或血清之間的初步差異性代謝物；

步驟3，通過(guò)質(zhì)譜成像可視化示出所述的初步差異性代謝物的空間分布，找到胰腺癌組織區(qū)域中異常分布的代謝物；

步驟4，對(duì)所述的異常分布的代謝物進(jìn)行輔助篩選：基于組織活檢和病理學(xué)的診斷，構(gòu)建基于代謝組學(xué)的胰腺癌診斷Lasso模型，篩選出特異性代謝物；

步驟5，通過(guò)樣本間聯(lián)合分析以及樣本間交叉驗(yàn)證，篩選出早期診斷標(biāo)志物。

2.如權(quán)利要求1所述的胰腺癌早期診斷標(biāo)志物的聯(lián)合篩選方法，其特征在于，步驟2中，所述的分析鑒定胰腺癌組織與正常組織之間的初步差異性代謝物包含以下步驟：

步驟2.1，以VIP大于1.0為標(biāo)準(zhǔn)保留樣本離子；

步驟2.2，對(duì)步驟2.1中得到的樣本離子進(jìn)行T檢驗(yàn)，以FDR0.05為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步保留樣本離子；

步驟2.3，對(duì)步驟2.2中得到的樣本離子進(jìn)行差異倍數(shù)分析，以差異倍數(shù)大于2.0或小于0.5為標(biāo)準(zhǔn)再進(jìn)一步保留樣本離子；

步驟2.4，將步驟2.3得到的樣本離子與代謝組數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，得到組織中76種初步差異性代謝物。

3.如權(quán)利要求1所述的胰腺癌早期診斷標(biāo)志物的聯(lián)合篩選方法，其特征在于，步驟4中，所述的輔助篩選是先在組織樣本中篩選特異性代謝物，包含以下步驟：

步驟4.1，將n＝150個(gè)組織樣本點(diǎn)作為訓(xùn)練集，n＝90個(gè)組織樣本點(diǎn)作為測(cè)試集，用于評(píng)估預(yù)先訓(xùn)練的Lasso模型的表現(xiàn)；

步驟4.2，將所述的76種初步差異性代謝物納入Lasso分類(lèi)器訓(xùn)練集的初始輸入變量，只有對(duì)分類(lèi)有貢獻(xiàn)的變量被賦予非零權(quán)重，當(dāng)只保留76個(gè)變量中的22個(gè)時(shí)，Lasso分類(lèi)器的性能在測(cè)試集上達(dá)到最高的準(zhǔn)確率；

步驟4.3，引用受試者工作特征ROC曲線來(lái)評(píng)價(jià)Lasso模型的最佳診斷性能，以ROC曲線上真實(shí)陽(yáng)性率最高、假陽(yáng)性率最低為截?cái)帱c(diǎn)，得到最佳診斷性能，表明CPSI-MS數(shù)據(jù)采集結(jié)合Lasso模型能夠作為與組織活檢互補(bǔ)的潛在體外診斷策略。

4.如權(quán)利要求1所述的胰腺癌早期診斷標(biāo)志物的聯(lián)合篩選方法，其特征在于，所述的聯(lián)合篩選方法是在組織樣本和血清樣本之間進(jìn)行聯(lián)合篩選。

5.如權(quán)利要求1所述的胰腺癌早期診斷標(biāo)志物的聯(lián)合篩選方法，其特征在于，步驟5中，所述的樣本間聯(lián)合分析以及樣本間交叉驗(yàn)證，包含以下步驟：

步驟5.1，采用CPSI-MS進(jìn)行獨(dú)立的血清代謝組學(xué)分析，分析鑒定胰腺癌患者和健康供體的血清樣本中初步差異性代謝物，確定出血清中74種初步差異性代謝物；

步驟5.2，進(jìn)行組織、血清聯(lián)合分析以闡明差異性代謝物共存于腫瘤組織和血清中，交叉比對(duì)組織中76種初步差異性代謝物和血清中74種初步差異性代謝物，確定得到18種差異性代謝物；

步驟5.3，將所述的18種差異性代謝物納入Lasso分類(lèi)器訓(xùn)練集的初始輸入變量，當(dāng)只保留18個(gè)變量中的15個(gè)時(shí)，Lasso分類(lèi)器的性能在測(cè)試集上達(dá)到最高的準(zhǔn)確率，表明CPSI-MS數(shù)據(jù)采集結(jié)合Lasso模型能夠作為血清篩查互補(bǔ)的潛在體外診斷策略。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的胰腺癌早期診斷標(biāo)志物的聯(lián)合篩選方法所得到的胰腺癌早期診斷標(biāo)志物，其特征在于，所述的胰腺癌早期診斷標(biāo)志物包含：2-丁酮酸、肌酐、N-甲基煙酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、甲硫氨酸、巖藻糖、色胺、辛酸、乙酰肉堿、色氨酸、丁酰肉堿、甘油磷脂酰膽堿、亞油酸、亞麻酸中的任意一種或者任意兩種以上的組合。

7.如權(quán)利要求6所述的胰腺癌早期診斷標(biāo)志物在制備胰腺癌早期診斷試劑或試劑盒中的應(yīng)用。

8.一種胰腺癌早期診斷的試劑，其特征在于，所述的試劑能夠檢測(cè)樣本中權(quán)利要求6所述的早期診斷標(biāo)志物的表達(dá)水平。