[發明專利]一種腸道菌群的過濾提取方法

在審

• 申請號: 202210060030.6
• 申請日: 2022-01-19
• 公開（公告）號: CN114350520A
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發明（設計）人: 陳章然;李源濤;林檀;林昊;譚文章;張幫周;張程;何劍全;肖傳興
• 申請（專利權）人: 廈門承葛生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02;C12N1/20;C12Q1/689
• 代理公司: 南昌金軒知識產權代理有限公司 36129
• 代理人: 夏軍

1.一種腸道菌群的過濾提取方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟S00初步處理：收集健康供體新鮮糞便a份，按稀釋比例溶解于b份的生理鹽水中，得到混合液D；

步驟S10洗脫處理：將步驟S00中的混合液D通過5層濾網過濾，其中濾網目數依次為50目、80目、100目、120目、150目，在每次過濾時用刮板手動協助過濾，收集得到d份菌群懸液E；

步驟S20離心處理：將步驟S10中得到的菌群懸液E離心處理得到菌泥F；

步驟S30產品獲取：將步驟S20中得到的菌泥F加入相應的凍存保護劑后放入冰箱中進行冷凍保存。

2.根據權利要求1所述一種腸道菌群的過濾提取方法，其特征在于：

還包括步驟S11取樣檢測：將步驟S10中得到的菌群懸液E取樣2份至不同的無菌離心管中離心處理，分別進行活菌數及菌群重量測定。

3.根據權利要求2所述一種腸道菌群的過濾提取方法，其特征在于：

在步驟S11中，在對活菌數測定時，先將離心得到的菌泥稀釋若干倍，用LIVE/DEADBacLight Bacterial Viability Kit對稀釋后的菌泥進行染色，采用BD Accuri C6流式細胞儀分析菌泥的活菌率和總菌數。

4.根據權利要求2所述一種腸道菌群的過濾提取方法，其特征在于：

在步驟S11中，在對菌群重量測定時，通過分析天平稱取離心后收集菌群的重量，并進行得率的計算。

5.根據權利要求2所述一種腸道菌群的過濾提取方法，其特征在于：

步驟S11中對活菌數測定以及菌群重量測定的試驗數據均采用SPSS 22.0Univariate方法單因素分析，對F檢驗達到顯著水平的因子，并進行方差分析并進行Duncan氏多重比較，各組試驗數據均以(平均值±標準差)表示。

6.根據權利要求5所述一種腸道菌群的過濾提取方法，其特征在于：

統計顯著性水平為P0.05，極顯著性水平為P0.01。

7.根據權利要求1所述一種腸道菌群的過濾提取方法，其特征在于：

還包括步驟S12，對步驟S10離心后的菌懸液取樣，使用QIAamp Fast DNA Stool MiniKIT(QIAGEN)試劑盒提取DNA樣本，基于16S rRNA V3-V4區段進行PCR文庫構建，通過Illumina HiSeq2500儀器進行高通量測序，對測序數據通過Usearch進行OTU聚類分析，以獲得菌群豐度和組成信息。

8.根據權利要求1所述一種腸道菌群的過濾提取方法，其特征在于：

所述步驟S20中，離心轉速設置為5000rpm。