[發明專利]一種刺五加糖蛋白的提取方法和應用

在審

• 申請號: 202210056639.6
• 申請日: 2022-01-18
• 公開（公告）號: CN114276408A
• 公開（公告）日: 2022-04-05
• 發明（設計）人: 邱智東;金葉;劉達
• 申請（專利權）人: 長春中醫藥大學
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K1/34;A61K8/64;A61Q19/00;A61Q19/08
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 錢云

本發明提供一種刺五加糖蛋白的提取方法和應用，所述刺五加糖蛋白的提取方法包括將刺五加粗粉進行加熱浸提的步驟，其中，浸提溶液為pH為5?9的PBS緩沖溶液，浸提溫度為30?40℃，所述加熱浸提的過程中還采用搖床輔助。本發明通過采用pH為5?9的PBS緩沖溶液作為浸提溶液，在特定浸提溫度下并輔以搖床配合提取，可以提高糖蛋白提取率，所得刺五加糖蛋白結構穩定，同時也確保了糖蛋白的活性，且本發明的提取方法操作簡單、條件溫和，具有良好的重復再現性，易于推廣應用。

技術領域

本發明涉及生物化學技術領域，尤其涉及一種刺五加糖蛋白的提取方法和應用。

背景技術

糖蛋白是寡糖鏈與多肽以多種形式共價相連且具有生物活性的物質，糖蛋白為生物體內重要生物大分子之一，廣泛存在于動植物和微生物中，甚至在單細胞有機體和病毒中也有發現，其以各種形式、種類分布于生物體的細胞內外液及組織中，構成生物體內的多種活性物質。天然糖蛋白具有抗氧化、抗腫瘤、提高免疫力等生理活性。糖蛋白對于生長發育、信息傳遞、免疫系統、神經系統等多種生命活動起重要作用，同時與多種疾病(如心血管疾病、肝腎病、糖尿病及腫瘤癌癥等)的發生相關。

刺五加，又稱刺拐棒、五加參、刺五甲、五加皮等，為五加科五加屬植物，分布于中國黑龍江、吉林、遼寧、河北和山西，刺五加是一種營養豐富、具有多種生理功能和開發潛力的根莖類藥材。刺五加用途廣泛，具有益氣健脾、補腎安神等功效，多用于治療脾肺氣虛，體虛乏力，食欲不振，肺腎兩虛，久咳虛喘，腎虛腰膝酸痛，心脾不足，失眠多夢等癥狀。

但至今尚未見有關刺五加糖蛋白的提取方法，現有技術中提及的刺五加提取物為粗提物，成分復雜，缺乏深入研究意義，其中糖蛋白的含量較低且純度不夠，無法進一步高端應用。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供一種刺五加糖蛋白的提取方法和應用。

第一方面，本發明提供一種刺五加糖蛋白的提取方法，包括將刺五加粗粉進行加熱浸提的步驟，其中，浸提溶液為pH為5-9的PBS緩沖溶液，浸提溫度為30-40℃，所述加熱浸提的過程中還采用搖床輔助。

現有技術一般采用水提醇沉的方法從刺五加藥材中提取活性成分，然后經過一系列提純步驟得到純度尚可的刺五加提取物，即現有的方法既繁雜，且所得產品品質一般。本發明研究發現，采用pH為5-9的PBS緩沖溶液作為浸提溶液，在特定浸提溫度下并輔以搖床配合提取，可以提高糖蛋白提取率，所得刺五加糖蛋白結構穩定，同時也確保了糖蛋白的活性，且本發明的提取方法操作簡單、條件溫和，具有良好的重復再現性，易于推廣應用。

進一步地，所述加熱浸提過程中，搖床的振搖速率為40-300r/min。

進一步地，所述加熱浸提過程中，料液比為1:10-1:20g/mL，浸提時間為6-48h，浸提次數為2-4次。

在本發明一個優選實施方式中，所述加熱浸提過程中，浸提溶液為pH為8的PBS緩沖溶液，浸提溫度為30℃，搖床的振搖速率為160r/min，料液比為1:15g/mL，浸提時間為12h，浸提次數為3次。

進一步地，在進行所述加熱浸提得到刺五加糖蛋白粗提液后，還包括去除游離蛋白和透析凍干的步驟。

在本發明提供的具體實施方式中，所述提取方法包括以下步驟：

(1)預處理：將刺五加藥材粉碎成刺五加粗粉；

(2)搖床輔助+加熱浸提：將步驟(1)得到的刺五加粉末與pH＝5-9PBS緩沖溶液按1:10-1:20g/mL的料液比混合均勻，搖床振搖速率為40-300r/min，30-40℃下加熱浸提6-48h，提取次數為1-4次，然后過濾，合并濾液，得到刺五加糖蛋白粗提液；

(3)除游離蛋白：將步驟(2)得到的刺五加糖蛋白粗提液采用Sevage法去除游離蛋白，得到刺五加糖蛋白溶液；