[發明專利]馬氏珠母貝黏液用于提取外泌體的用途、外泌體及其提取方法和應用

在審

• 申請號: 202210053356.6
• 申請日: 2022-01-18
• 公開（公告）號: CN114480249A
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 李承勇;洪鵬志;周春霞;千忠吉;任磊;梁燕秋;孫省利
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學;廣東海洋大學深圳研究院
• 主分類號: C12N5/07
• 分類號: C12N5/07;A61K35/618;A61P17/00;A61P29/00
• 代理公司: 北京隆源天恒知識產權代理有限公司 11473
• 代理人: 丁晴晴

本發明提供了一種馬氏珠母貝黏液用于提取外泌體的用途、外泌體及其提取方法和應用。本發明采用超速離心法從馬氏珠母貝黏液中分離得到囊泡狀納米顆粒，并鑒定為外泌體，由此為從海洋生物中提取生物活性外泌體提供了參考，同時也提高了馬氏珠母貝的利用價值。本發明從馬氏珠母貝黏液中提取的外泌體能夠增強細胞活力，降低細胞內ROS水平，抑制NF?κB和NLRP3通路的激活，降低相關炎癥因子mRNA的表達水平，具有一定的抗炎作用。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體而言，涉及一種馬氏珠母貝黏液用于提取外泌體的用途、外泌體及其提取方法和應用。

背景技術

外泌體和細胞外囊泡是由脂質、蛋白質、核酸等生物因子組成的球形納米顆粒，目前國際上對于細胞外囊泡和外泌體并沒有明確的分類，通常情況下，將他們稱為囊泡狀納米顆粒。作為一種細胞分泌的囊泡狀納米顆粒，外泌體可以在細胞之間傳遞物質信息，因此外泌體已被應用于多種疾病的治療，如抗腫瘤、抗炎癥及抗氧化等。由于外泌體是細胞產物，因此，與其他治療方法相比，使用外泌體作為治療方法具有更低的細胞毒性和更高的生物相容性。

外泌體分布在許多生物體的體液和細胞中，但大多數外泌體的分離來源主體仍然是人類細胞，如間充質干細胞。然而，人源細胞外泌體存在許多局限性，如分離產量低和分離成本高。因此，尋找新的外泌體來源來取代人類細胞來源外泌體顯得尤為重要。有研究發現外泌體已從卷心菜中分離出來，并經過鑒定，它們具有相關抗炎特性，而在海洋生物中，也有報道發現從海參中分離出具有類似抗炎作用的細胞外囊泡。此外，有研究成功從鱈魚黏液中分離和提取出外泌體，并發現它們含有免疫相關蛋白。然而，與人類和植物來源的外泌體相比，從海洋生物中提取外泌體的研究仍相對缺乏。

發明內容

本發明解決的問題是從海洋生物中提取一種新型的外泌體。

為解決上述問題，本發明第一方面提供一種馬氏珠母貝黏液用于提取外泌體的用途。

本發明第二方面提供一種外泌體的提取方法，采用超速離心法和過濾方法從馬氏珠母貝黏液中提取外泌體。

較佳地，所述采用超速離心法和過濾方法從馬氏珠母貝黏液中提取外泌體包括：

對所述馬氏珠母貝黏液進行過濾及初步離心處理，得到待提取液；

對所述待提取液進行超速離心處理，得到第二底部沉淀；

用緩沖液重新懸浮所述第二底部沉淀，所得重懸液即為所述外泌體。

較佳地，對所述待提取液進行兩次所述超速離心處理得到所述第二底部沉淀，兩次所述超速離心處理的離心力均為100000g。

較佳地，所述對所述待提取液進行兩次所述超速離心處理包括：

將所述待提取液置于水平轉子中，進行第一次超速離心處理70min，棄去上清液，得到第一底部沉淀；

對所述第一底部沉淀進行洗滌后，進行第二次超速離心處理90min，棄去上清液，得到所述第二底部沉淀。

較佳地，采用PBS溶液對所述第一底部沉淀進行洗滌。

較佳地，所述對所述馬氏珠母貝黏液進行過濾及初步離心處理包括：

對所述馬氏珠母貝黏液進行過濾后，得到濾液；

對所述濾液進行第一次離心處理和第二次離心處理，得到第一上清液，其中，所述第一次離心處理的離心力為500g，離心時間為10min，所述第二次離心處理的離心力為2000g，離心時間為10min；

對所述第一上清液進行第三次離心處理，得到的第二上清液即為所述待提取液，其中，所述第三次離心處理的離心力為10000g，離心時間為30min。

較佳地，所述緩沖液包括PBS溶液。