[發明專利]對磷脂酰肌醇聚糖-3（GPC3）具有親和力的人脂質運載蛋白2的突變蛋白

在審

• 申請號: 202210050736.4
• 申請日: 2016-05-18
• 公開（公告）號: CN114456252A
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: M·欣納;A·艾樂斯道夫爾;R·S·貝萊巴;M·阿洛伊;A·維登曼;G·馬茨欽格;M·修爾斯邁耶
• 申請（專利權）人: 皮里斯制藥有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/12;A61K38/17;A61P17/00;A61P1/16;A61P35/00
• 代理公司: 北京瑞恒信達知識產權代理事務所(普通合伙) 11382
• 代理人: 曹津燕;丁磊

1.一種脂質運載蛋白突變蛋白，其能夠以約1nM或更低的K_D的親和力結合磷脂酰肌醇聚糖-3(GPC3)，其中，與成熟hNGAL(SEQ ID NO:1)的線性多肽序列相比，所述突變蛋白在序列位置36、40、41、49、52、65、68、70、72、73、77、79、81、87、96、100、103、105、106、125、127、132、134、136和/或175處包含至少20個突變的氨基酸殘基。

2.根據權利要求1所述的突變蛋白，其中，與所述成熟hNGAL(SEQ ID NO:1)的線性多肽序列相比，所述突變蛋白的氨基酸序列包含以下突變的氨基酸殘基中的至少一個：Leu 36→Val或Arg.；Ala 40→Leu、Val或Gly；Ile 41→Leu、Arg、Met、Gly或Ala；Gln 49→Pro或Leu；Tyr 52→Arg或Trp；Asn 65→Asp；Ser 68→Val、Gly、Asn或Ala；Leu 70→Arg、Ser、Ala或Val；Arg 72→Asp、Trp、Ala或Gly；Lys 73→Gly、Arg、Asn、Glu或Ser；Cys 76→Val或Ile；Asp 77→His、Met、Val、Leu、Thr或Lys；Trp 79→Lys、Ser 或Thr；Arg 81→Gly；Cys 87→Ser；Asn 96→Arg、Asp、Gln或Pro；Tyr 100→Gly、Glu、Pro或Gln；Leu 103→Glu、Gln、Asn、Gly、Ser或Tyr；Ser 105→Ala；Tyr 106→Asn、Ser或Thr；Lys 125→Glu；Ser 127→Arg或Tyr；Tyr 132→Trp或Ile；Lys 134→Ala或Phe；Thr 136→Ile；和Cys 175→Ala。

3.根據權利要求1或2中任一項所述的突變蛋白，其中，當通過基本上如實施例4所述的表面等離子體共振(SPR)分析測量時，所述突變蛋白以比SEQ ID NO:3的突變蛋白更強的結合親和力結合GPC3。

4.根據權利要求1或2中任一項所述的突變蛋白，其中，當通過基本上如實施例5所述的基于用人、小鼠或獼猴GPC3轉染的SK-HEP-1細胞的分析測量時，所述突變蛋白相比于SEQID NO:4的突變蛋白顯示改善的EC50值。

5.根據權利要求1或2中任一項所述的突變蛋白，其中，當通過基本上如實施例6所述的基于熒光的熱變性分析測量時，所述突變蛋白比SEQ ID NO:3的突變蛋白更具生物物理穩定性。

6.根據權利要求1或2中任一項所述的突變蛋白，其中，所述突變蛋白在對應于所述成熟hNGAL(SEQ ID NO:1)的線性多肽序列的序列位置28的序列位置處不包含突變。

7.根據權利要求1或2中任一項所述的突變蛋白，其中，在所述突變蛋白的相應位置處移除在所述成熟hNGAL(SEQ ID NO:1)的線性多肽序列的位置65處的天然N-糖基化位點Asn。