[發明專利]一種NK細胞保護運輸液

有效

• 申請號: 202210050716.7
• 申請日: 2022-01-17
• 公開（公告）號: CN114342919B
• 公開（公告）日: 2022-11-15
• 發明（設計）人: 胡向兵;姬云
• 申請（專利權）人: 蘇州科貝生物技術有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京精金石知識產權代理有限公司 11470
• 代理人: 宋秀蘭

本發明涉及免疫細胞技術領域，具體涉及一種NK細胞保護運輸液。所述NK細胞保護運輸液，包括如下組分：HEPES緩沖液、葡萄糖注射液、海藻糖溶液、人血白蛋白、芒果提取物和甘氨酸，具有適用于低溫保存、細胞活性高、保存時間長、安全性高、運輸成本低、操作簡單的優點。

技術領域

本發明涉及免疫細胞技術領域，具體涉及一種NK細胞保護運輸液。

背景技術

自然殺傷細胞(natural killer cell，NK)作為機體固有免疫系統的細胞毒性淋巴細胞，在機體的免疫監視中扮演著非常重要的角色，在抗腫瘤及抗病毒的免疫應答中發揮重要作用。NK細胞識別靶細胞無MHC限制性，不需抗原激活，更不需抗體的協助，就可以直接識別，非特異性地殺傷靶細胞，例如殺傷被病毒感染的細胞和腫瘤細胞，且這種抗感染和抗腫瘤的殺傷作用是廣譜的，屬于天然免疫系統的重要細胞組成成分，具有免疫監視和免疫清除功能，是人體防御體系的第一道屏障。同時，還可以產生一系列的細胞因子，進而對機體的適應性免疫進行調節，是連接機體固有免疫和特異性免疫的橋梁。

近年來，隨著對NK細胞活化及功能的深入研究，NK細胞免疫治療腫瘤在臨床上具有良好的應用前景，NK細胞過繼免疫療法也成為腫瘤治療的新策略。

制備培養好的NK細胞在回輸前一般有個運輸的過程，如不回輸給患者，一般則需冷凍保存。NK細胞制備擴增后如何保存運輸是個問題，因為NK細胞從制備到使用需要一段時間，細胞處理完以后需馬上輸注(12小時內)，否則時間過長會影響細胞活性與品質。

NK細胞體外培養與臨床使用時間節點有時不能有效銜接，如果延長培養時間會導致成本增加，同時培養時間超過最佳對數生長期后細胞的生長狀態及活性會下降，從而影響細胞的活性與后續治療質量，因此培養后的NK細胞如何保存成了必須考慮并解決的問題。

目前NK細胞運輸方式通常有兩種。一種是在凍結狀態下，液氮凍存狀態下進行運輸，另一種是非凍結運輸。兩種方法都存在一些弊端。

液氮凍存狀態下可維持細胞穩定性，凍存液中通常加入二甲基亞砜(dimathylsulfoxide，DMSO)。DMSO是一種細胞高毒性的化學試劑，會導致人體產生惡心，頭痛，嘔吐甚至休克的反應，在常規細胞培養中被嚴格控制在1％以下。但是，為了保護細胞，凍存液中的DMSO比例高達10％。

比如中國專利申請CN110100812A公開了一種免疫細胞的凍存回輸液，此凍存回輸液由0.9％的氯化鈉生理鹽水溶液和以下組分組成：5％-10％的二甲基亞砜(DMSO)，1％-3％的右旋糖酐，1％-5％的葡萄糖，5％-10％的人血清白蛋白(Human Serum Albumin，HSA)，50μg/mL-250μg/mL的維生素C和50μg/mL-150μg/mL的維生素E，0.5％的葡萄糖酸鈉，0.03％-0.04％的氯化鉀和0.03％-0.04％的氯化鎂。

雖然在低溫凍存條件下DMSO可以起到保護作用，但是復蘇過程中，一旦細胞復溫則會遭受不良環境，這也是細胞凍存和復蘇過程中細胞死亡的一個主要原因。并且液氮狀態下進行運輸危險性高(液氮溫度為-196℃)，細胞經過凍存后復蘇過程中會引起細胞活性下降、對后續治療造成影響。

非凍結運輸。常溫培養基下運輸，但是培養液晃動，會導致細胞發生機械損傷。為保護細胞，需把培養瓶灌滿培養液，才能安全運輸，這樣耗費培養基過多，體積較大，成本就會增加。對技術人員、操作環境及儀器的要求較高，使其應用受到限制。

為了降低運輸成本，使操作簡單化，同時保證細胞的活性和安全性，急需一種新的NK細胞運輸方式——低溫保存細胞。