[發明專利]一種重組桿狀病毒及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202210049785.6
• 申請日: 2022-01-17
• 公開（公告）號: CN114480308A
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 趙卓;吳峰;胡義彬;武沛澤;李曉亮;孟文文;石凱亓;張紀飛;張虎;伏顯華;江厚生;王力
• 申請（專利權）人: 北京華夏興洋生物科技有限公司;華夏興洋（江蘇）生物科技有限公司;北京生泰爾科技股份有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/866;C12N15/40;C07K14/18;C07K16/10;A61K39/12;A61P31/14;G01N33/569;C12R1/93
• 代理公司: 北京悅和知識產權代理有限公司 11714
• 代理人: 司麗春;劉青霞

1.一種重組桿狀病毒，其特征在于，其包含一個或多個拷貝的牛病毒性腹瀉病毒E2蛋白的編碼基因，所述E2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根據權利要求1所述的重組桿狀病毒，其特征在于，如SEQ ID NO.1所示的E2蛋白的編碼基因的序列如SEQ ID NO.3所示；

可選地，所述牛病毒性腹瀉病毒E2蛋白的編碼基因的5’端連接有BVDV2-Erns基因的編碼序列，可選地，所述BVDV2-Erns基因的編碼序列如SEQ ID NO.5所示；

可選地，所述重組桿狀病毒含有如SEQ ID NO.7所示的序列；

可選地，所述E2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，可選地，如SEQ ID NO.2所示的E2蛋白的編碼基因的序列如SEQ ID NO.4所示。

3.根據權利要求1或2所述的重組桿狀病毒，其特征在于，所述牛病毒性腹瀉病毒E2蛋白的編碼基因在P10啟動子的控制下轉錄；

可選地，用于構建所述重組桿狀病毒的基礎轉移載體為pFastBacDual。

4.一種重組桿狀病毒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)密碼子優化：對編碼牛病毒性腹瀉病毒E2蛋白的基因進行密碼子優化，優化后的E2蛋白的編碼基因序列如SEQ ID NO.3所示；可選地，在如SEQ ID NO.3所示的序列的5’端連接BVDV2-Erns基因的編碼序列，獲得如SEQ ID NO.7所示的BVDV2-Erns-E2基因序列；

(2)載體構建：將如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.7所示的序列與基礎轉移載體連接，構建含有一個或多個拷貝的E2蛋白編碼基因的重組轉移載體；可選地，基礎轉移載體為pFastBacDual；

(3)將步驟(2)重組轉移載體轉入大腸桿菌DH10Bac，獲得攜帶一個或多個拷貝的E2蛋白編碼基因的重組桿粒；

(4)將步驟(3)的重組質粒導入昆蟲細胞，獲得重組桿狀病毒。

5.權利要求1至3任一所述的重組桿狀病毒或采用權利要求4所述的制備方法制備得到的重組桿狀病毒在制備牛病毒性腹瀉病毒的抗原、抗體或亞單位疫苗中的應用。

6.一種牛病毒性腹瀉病毒亞單位疫苗，其特征在于，其包含牛病毒性腹瀉病毒E2蛋白，所述E2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。

7.根據權利要求6所述的牛病毒性腹瀉病毒亞單位疫苗，其特征在于，所述E2蛋白為采用權利要求1至3任一所述的重組桿狀病毒或采用權利要求4所述的制備方法制備的重組桿狀病毒表達得到。

8.一種牛病毒性腹瀉病毒亞單位疫苗的制備方法，其特征在于，采用重組桿狀病毒表達牛病毒性腹瀉病毒E2蛋白，所述重組桿狀病毒為權利要求1至3任一所述的重組桿狀病毒或采用權利要求4所述的制備方法制備得到的重組桿狀病毒；

可選地，包括如下步驟：

1)將所述重組桿狀病毒導入昆蟲細胞，培養，表達牛病毒性腹瀉病毒E2蛋白；

2)分離和純化E2蛋白；

3)將經純化的E2蛋白與佐劑混合，制備亞單位疫苗；可選地，所述佐劑包括605佐劑，可選地，純化的E2蛋白與佐劑605的重量比為1∶(0.8～1.5)。

9.一種疫苗組合物，其特征在于，含有權利要求1至3任一所述的重組桿狀病毒、或采用權利要求4所述的制備方法制備得到的重組桿狀病毒、或權利要求6或7所述的牛病毒性腹瀉病毒亞單位疫苗、或權利要求8所述的制備方法制備的牛病毒性腹瀉病毒亞單位疫苗。

10.一種檢測2型牛病毒性腹瀉病毒病的診斷試劑盒，其特征在于，含有權利要求1至3任一所述的重組桿狀病毒、或采用權利要求4所述的制備方法制備得到的重組桿狀病毒、或權利要求6或7所述的牛病毒性腹瀉病毒亞單位疫苗、或權利要求8所述的制備方法制備的牛病毒性腹瀉病毒亞單位疫苗。