[發明專利]一種驅蟲斑鳩菊地上部位組織中內生真菌的分離純化方法及其用途

在審

• 申請號: 202210048437.7
• 申請日: 2022-01-17
• 公開（公告）號: CN114350527A
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發明（設計）人: 阿布力米提·伊力;阿吉艾克拜爾·艾薩;尼格熱·如斯坦木娃;牛力濤
• 申請（專利權）人: 中國科學院新疆理化技術研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;A61K36/06;A61K36/28;A61P31/04;A61P31/10;A61P17/00;A61K8/9728;A61Q19/04;A61K127/00;A61K133/00;A61K135/00;C12R1/66;C12R1/8
• 代理公司: 烏魯木齊中科新興專利事務所(普通合伙) 65106
• 代理人: 張莉

1.一種驅蟲斑鳩菊地上部位組織中內生真菌的分離純化方法，其特征，按下列步驟進行：

a、前處理及組織液的獲取：選用新疆和田地區的驅蟲斑鳩菊的花、莖、葉分別用水清洗泥土后，使用蒸餾水沖洗6次，并依次濃度為70%乙醇浸泡1-2 min、濃度為5.25%次氯酸鈉浸泡2-5 min和濃度為70%乙醇浸泡30-60s，再用蒸餾水沖洗，將沖洗后的花、莖、葉各部位取2g并壓碎獲得組織液，再分別加入2-3 mL蒸餾水，各孵化3 min，得到組織液；

b、選擇氯霉素100μg/mL 作為抗菌劑；

c、選擇固體培養基PDA由馬鈴薯提取物4 g/L、葡萄糖20g/L和瓊脂15 g/L組成，pH為6.0；

d、將步驟c中的培養基PDA經溫度120℃高壓滅菌20 min，加入步驟b中的抗菌劑混合，倒入平板培養皿中，再加入步驟a得到的花、莖、葉各部位組織液100μL，在溫度28℃下培養7-10天，得到粗純化真菌；

e、培養后在培養基平板上劃線不同顏色、形狀和濃度的菌落，利用培養基PDA培養1周，對不同顏色、形狀和大小的均勻菌落用于DNA分離，得到9種植物內生真菌，分別是Aspergillus terreus NR-01、Trichoderma harzianum NR-02、 Ovatospora senegalensis NR-03、Chaetomium globosum NR-04、Thielavia subthermophila NR-06、Thielavia microspore NR-08、Aspergillus calidoustus NR-10、Mucor circinelloidesNR-11 和 Aspergillus sp. NR-12，利用DNA基因序列對內生真菌進行鑒定。

2.根據權利要求1所述方法獲得的內生真菌在制備抑制金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌中的用途。

3.根據權利要求1所述方法獲得的內生真菌在促進黑色素中的用途。