[發(fā)明專利]一種用于聯(lián)合檢測CA125與HE4的試紙條

在審

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• 申請日: 2022-01-17
• 公開（公告）號: CN114487379A
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 丁收年;劉浩
• 申請（專利權(quán)）人: 東南大學(xué)
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/558;G01N33/533;G01N21/01;G01N21/64
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 陸濤

本發(fā)明公開了一種用于聯(lián)合檢測CA125與HE4的試紙條，該試紙條包括基底襯板、硝酸纖維素膜、吸水紙與樣品墊；所述硝酸纖維素膜粘貼于基底襯板中部，吸水紙與樣品墊分別粘附于硝酸纖維素膜兩端并與硝酸纖維素膜部分重疊；所述硝酸纖維素膜上依次間隔涂覆有CA125檢測帶、HE4檢測帶與羊抗鼠多克隆抗體的質(zhì)控帶。本發(fā)明采用富含生物素基團且發(fā)光的樹枝狀介孔二氧化硅納米粒子與檢測樣本進行預(yù)混來檢測，采用時間分辨熒光免疫層析方法,能夠同時檢測人CA125與HE4兩個卵巢癌腫瘤標(biāo)志物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫測定技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于聯(lián)合檢測CA125與HE4的試紙條。

背景技術(shù)

卵巢癌是世界上威脅女性健康的最具侵襲性的婦科惡性腫瘤之一。患者在疾病早期沒有明顯癥狀，因此在檢測時往往已處于晚期，導(dǎo)致更高的死亡率。由于早期癥狀不明顯，缺乏有效的早期檢測方法，卵巢癌的發(fā)病率逐年上升，死亡率居婦科腫瘤之首。此前，卵巢癌的篩查主要依據(jù)血清糖類抗原125(CA125)的表達(dá)水平。然而，CA125在卵巢癌早期的表達(dá)水平很低，無法檢測。因此，CA125的單一測試不再足以確定卵巢癌患者的患病率。對于CA125的單一檢測不再足以確定是否患有卵巢癌。

早發(fā)現(xiàn)早治療是目前檢測的主流思路。側(cè)向流檢測(LFA)作為眾所周知的一次性紙基快速檢測工具，具有檢測時間短、操作簡便、經(jīng)濟實惠的特點。目前，LFA主要使用的標(biāo)記物是金納米粒子和高分子納米球，但遠(yuǎn)不能滿足快速檢測所需的靈敏度和特異性。另一方面，作為關(guān)鍵組成部分，LFA的識別元件長期依賴于抗體，而大多數(shù)研究使用羧基和氨基之間的經(jīng)典共價鍵來富集和固定抗體。該方法固定的抗體數(shù)量有限，導(dǎo)致LFA檢測靈敏度不足。

近年來，HE4成為卵巢癌輔助檢測的研究熱點。HE4是由上皮細(xì)胞分泌的一種蛋白，屬于乳清酸性四硫化核蛋白。2003年被發(fā)現(xiàn)HE4作為一種分泌型糖蛋白在EOC中過表達(dá)，首次證明了血清HE4蛋白水平具有作為卵巢癌生物標(biāo)志物的潛力。HE4的表達(dá)在不同類型卵巢癌組織及同一類型不同期別的卵巢癌組織中有顯著差異，HE4在漿液性卵巢癌的陽性表達(dá)率(100％)高于黏液性卵巢癌(66.67％)；HE4在早期卵巢惡性腫瘤(Ⅰ/Ⅱ期)中的表達(dá)率(66.67％)低于晚期(Ⅲ/Ⅳ期，97.22％)；高度分化的卵巢癌組織HE4陽性表達(dá)率(37.50％)低于低分化組織(92.00％)。HE4在卵巢癌的早期檢測及鑒別中具有重要的臨床意義，且在預(yù)測EOC患者預(yù)后等方面明顯優(yōu)于CA125，目前臨床上更多用CA125聯(lián)合HE4預(yù)測卵巢腫瘤為惡性的風(fēng)險。

因此，開發(fā)一種高靈敏度的紙基快速檢測工具用于聯(lián)合檢測血清中HE4和CA125水平對卵巢癌的早期檢測具有較好的研究和判斷價值。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：針對現(xiàn)有技術(shù)的不足與缺陷，本發(fā)明提供一種用于聯(lián)合檢測CA125與HE4的試紙條，采用富含生物素基團且發(fā)光的樹枝狀介孔二氧化硅納米粒子與檢測樣本進行預(yù)混來檢測，采用時間分辨熒光免疫層析方法,能夠同時檢測人CA125與HE4兩個卵巢癌腫瘤標(biāo)志物。

技術(shù)方案：本發(fā)明的用于聯(lián)合檢測CA125與HE4的試紙條，其特征在于：該試紙條包括基底襯板、硝酸纖維素膜、吸水紙與樣品墊；所述硝酸纖維素膜粘貼于基底襯板中部，吸水紙與樣品墊分別粘附于硝酸纖維素膜兩端并與硝酸纖維素膜部分重疊；所述硝酸纖維素膜上依次間隔涂覆有CA125檢測帶、HE4檢測帶與羊抗鼠多克隆抗體的質(zhì)控帶。

其中，該試紙條的示蹤物為有機分子-無機材料納米復(fù)合物、熒光劑或者量子點。

其中，所述的示蹤物為有機分子-無機材料納米復(fù)合物。

其中，所述的有機分子-無機材料納米復(fù)合物為1,1,2,2-四(4-羧基苯)乙烯-生物素酰胺分子與樹枝狀介孔二氧化硅納米粒子。