[發明專利]一種深綠木霉C61

有效

• 申請號: 202210046270.0
• 申請日: 2022-01-17
• 公開（公告）號: CN114058521B
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發明（設計）人: 李紅梅;魏艷麗;楊凱;李紀順;扈進冬
• 申請（專利權）人: 山東省科學院生態研究所（山東省科學院中日友好生物技術研究中心）
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/38;A01P21/00;C09K17/14;C12R1/885;C09K101/00
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 劉寶

本發明涉及一種深綠木霉C61，屬于微生物技術領域。該深綠木霉（Trichoderma atroviride）C61保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.21035，保藏日期為2020年12月08日，保藏機構地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號。本發明還提供了一種深綠木霉C61在降解酚酸及其衍生物中的應用。本發明的深綠木霉C61對濃度分別為100mg/L的9種混合酚酸的降解如下：阿魏酸、苯甲酸、水楊酸及肉桂酸2天完全降解；對羥基苯甲酸、丁香酸及對香豆酸3天完全降解；香草酸、香草醛6天完全降解。同時可有效緩解酚酸及其衍生物對植物的自毒作用，修復連作障礙土壤。

技術領域

本發明涉及微生物的技術領域，具體涉及一種深綠木霉C61。

背景技術

自毒物質是導致連作障礙的主要因素之一，而酚酸及其衍生物是活性較強的一類，其通過植物揮發、淋溶、根系分泌、凋落物及其殘體分解等方式釋放到土壤環境中，并在土壤中累積，顯著改變土壤的理化性質。微生物群落結構和多樣性，使土傳病原微生物比例升高，植株發病率增加。同時酚酸及其衍生物也影響植物的膜系統、光合作用及體內酶活，從而使植物生長受到抑制。酚酸及其衍生物在連作土壤中的積累特性已在水稻、大豆、花生、黃瓜、中藥材及林木等多種植物中被證實，并且一種植物能同時產生多種酚酸類自毒物質，且不同植物產生的酚酸及其衍生物差異較大。

利用微生物分解土壤中的酚酸及其衍生物，從而降低其在土壤中的含量，緩解其對作物的自毒作用，是解決連作障礙的一種有效途徑。且微生物降解廉價高效，綠色環保，具有廣闊的應用前景。因此，篩選一種能高效降解多種酚酸的菌株并應用于連作障礙土壤修復，具有重要的現實意義。

發明內容

為了克服現有技術存在的上述不足，本發明提供一種深綠木霉C61。本發明的深綠木霉C61能夠高效降解對羥基苯甲酸、香草酸、丁香酸、香草醛、對香豆酸、阿魏酸、苯甲酸、水楊酸及肉桂酸，有效緩解酚酸及其衍生物對植物的自毒作用。

一種深綠木霉（Trichoderma atroviride）C61，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCC NO. 21035，保藏日期為2020年12月08日，保藏機構地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號。

一種含深綠木霉C61的孢子懸液的制備方法，所述方法包括將深綠木霉C61菌株接種到PDA平板上，放置于25℃培養箱中生長4-5天，刮取一個平板的孢子，加入無菌水中后，過4層無菌鏡頭紙，所得濾液即為孢子懸液。

一種含深綠木霉C61的篩選方法，具體篩選方法如下：取1×10⁵個孢子接入到酚酸液體培養基（PDB培養基）中，設不接菌的培養基為對照，置于25℃、150rpm搖床中培養5天；培養結束后，取1mL培養基，10000g離心2min，再取上清200mL加入10mL 0.1%的溴甲酚綠進行顯色，根據溶液顏色的深淺，篩選降解率高的菌株，即為深綠木霉C61。

優選的，所述酚酸液體培養基（PDB培養基）的制備方法如下：取土豆200g，蒸餾水煮沸30min，紗布過濾后冷卻定容至1L，得到土豆水；取土豆水100mL、蒸餾水900mL、對羥基苯甲酸、香草酸、丁香酸、對香豆酸、阿魏酸、苯甲酸、香草醛、水楊酸及肉桂酸各100mg，混合均勻，配制成酚酸液體培養基，將液體培養基分裝入試管中，高壓滅菌，得酚酸液體培養基。

一種深綠木霉C61的應用，所述深綠木霉C61用于降解酚酸及其衍生物。

優選的，所述酚酸及其衍生物包括對羥基苯甲酸、香草酸、丁香酸、香草醛、對香豆酸、阿魏酸、苯甲酸、水楊酸或肉桂酸中的至少一種。

一種含深綠木霉C61的孢子懸液或其為有效成分的制劑在緩解酚酸及其衍生物對植物的自毒作用或修復酚酸及其衍生物引起的連作障礙土壤中的應用。