[發明專利]一種多肽及含有該多肽的冷凍保存液

在審

• 申請號: 202210043367.6
• 申請日: 2022-01-14
• 公開（公告）號: CN114539382A
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發明（設計）人: 李娜
• 申請（專利權）人: 君創永晟(東莞)生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/12;A01N1/02
• 代理公司: 北京知元同創知識產權代理事務所(普通合伙) 11535
• 代理人: 謝怡婷

本發明公開了一種多肽和含有該多肽的冷凍保存液，其中，所述多肽是LEA蛋白的功能區，在水溶液中具有良好的生物相容性好，是理想的控冰材料。含有上述多肽的冷凍保存液用于冷凍保存各類細胞具有較高的存活率，僅能達到常規冷凍液冷凍各類細胞的有效性，且與目前普遍使用的含有10％的DMSO的商品化冷凍保存液的冷凍保存復蘇率相當。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種多肽和含有該多肽的冷凍保存液以及這些多肽和含有該多肽的冷凍保存液的應用。

背景技術

冷凍保存是指將生物材料保存于超低溫狀態下，使細胞新陳代謝和分裂速度減慢或者停止，一旦恢復正常生理溫度又能繼續發育。現代醫療的發展經歷了化學藥、生物藥，并已向細胞藥邁進。然而(離體)體外培養的細胞會經歷復制性的衰老和死亡。因此，“細胞”成為貨架上即取即用的藥物，首先要解決的就是存儲問題。作為目前唯一有望實現“細胞”長期存儲和遠程運輸的技術，冷凍保存已成為細胞治療不可或缺的技術支撐。通常，在細胞冷凍保存過程中，需要添加冷凍保存試劑以使細胞免受冰凍傷害。因此，冷凍保存試劑是決定冷凍保存能否成功的關鍵物質基礎。

目前最常用的冷凍保存試劑為玻璃化凍存試劑，其中含有大量的強水合作用的小分子如二甲基亞砜(DMSO≥10％)，DMSO的添加可以抑制冷凍保存過程中冰晶的形成(細胞內外的液體均成玻璃化狀態而避免冰晶的生成)。然而，DMSO具有細胞毒性，酶毒性等導致冷凍保存試劑對細胞的毒副作用，嚴重影響冷凍保存對象復蘇后的生物安全性甚至功能表達。

表1 LEA蛋白1-4以及6-7的保守結構域

然而，在自然界中很多生物因為體內存在可以對抗極端環境脅迫的抗逆性蛋白，使得它們在零下30甚至50攝氏度的低溫環境中生存而免受冰凍傷害。比如，一類在干旱以及寒冷環境中生存的生物體內廣泛存在的抗逆性蛋白，即：胚胎發育晚期豐富蛋白(LateEmbryogenesis Abundant Protein)，縮寫為LEA蛋白。在生物體受環境脅迫(低溫、干旱和鹽漬等逆境)時，便會伴隨LEA蛋白的積累和表達來維持其正常的代謝活動。比如，植物受到水分以及低溫脅迫時體內會高表達LEA蛋白使其免受冰凍以及干旱傷害；在生物體內過表達LEA蛋白，可以是增強其對低溫和滲透脅迫的抗性。LEA蛋白分為7個家族，除了五族LEA蛋白外，其余6族的LEA蛋白都有1個以上的由多個氨基酸(≥4)序列構成的保守結構域組成(表1)，保守結構域可以在生物體內具有多個拷貝，對LEA蛋白抗逆性功能的維持發揮重大作用。自然界的生物體并不依賴DMSO這類強水合的小分子來對抗冰凍損傷，為設計制備可以對抗冷凍保存過程中冰晶以及由此產生的滲透壓力的抗逆性材料提供新思路。LEA蛋白的保守結構域合成簡單且是LEA蛋白維持其抗逆性功能的重要保證，因此，該專利首次設計制備LEA蛋白的保守結構域并表征其在冷凍保存不同類型細胞應用中的效果。目前沒有將LEA蛋白的保守結構域用作冷凍保護劑凍存各類細胞的商品化凍存液和應用。

發明內容

為改善現有技術的上述缺陷，本發明提供LEA蛋白保守結構域，以下簡稱“LEA蛋白功能區的多肽”，和含有該類多肽的冷凍保存液，以及這些多肽和含有該多肽的冷凍保存液的應用。

本發明通過如下技術方案實現:

本發明提供了一種多肽，其特征在于，包含LEA蛋白功能區的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、類似物或衍生物。優選地，所述多肽是LEA蛋白功能區。

根據本發明，所述多肽選自下述a)至c)中的至少一組：

a)具有表1中所示的氨基酸序列；

b)由表1中所示的氨基酸序列的多肽兩端缺失或添加一個或多個氨基酸而形成的且具有a)所述多肽的功能的衍生多肽；或

c)與表1中所示的氨基酸序列的多肽相比，同源性高于90％。