[發明專利]一種在壓力條件下培養細胞的方法

在審

• 申請號: 202210037430.5
• 申請日: 2022-01-13
• 公開（公告）號: CN114350591A
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發明（設計）人: 李猛智;舒斌;祁少海
• 申請（專利權）人: 中山大學附屬第一醫院
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;C12M1/00
• 代理公司: 北京知匯林知識產權代理事務所(普通合伙) 11794
• 代理人: 董濤

1.一種在壓力條件下培養細胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：預先形成承載細胞的凝膠，所述細胞連同所述凝膠轉移至壓力培養板的海綿環中，加壓培養所述細胞。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，預先形成多塊形狀相同的所述凝膠，分別轉移至所述壓力培養板的不同海綿環中。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：以細胞培養板為容器，在其中預先形成承載細胞的凝膠，所述細胞在所述細胞培養板中經適應性培養后，連同所述凝膠轉移至壓力培養板的海綿環中，添加培養基至所述壓力培養板外槽，加壓培養所述細胞。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述預先形成承載細胞的凝膠的步驟包括：在容器中依次加入緩沖液、NaOH溶液、鼠尾I型膠原溶液和含細胞的F12/DMEM培養基，混勻后靜置，在所述容器中形成凝膠。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述凝膠的體積為0.5～2mL；所述凝膠的厚度0.5～1.5cm。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述細胞的適應性培養時間為6-8小時。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，利用移液器，使用剪去前端部分的槍頭吸附轉移所述凝膠至壓力培養板的海綿環中，轉移后，在所述壓力培養板外槽添加3mL培養基。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括在加壓培養結束后，酶解所述凝膠和回收所述細胞的步驟。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，酶解所述凝膠和回收所述細胞的步驟包括：轉移所述凝膠至新容器中，加入膠原酶溶液至所述凝膠，搖床震蕩消化，消化完后所得液體，經離心，獲得細胞沉淀。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，酶解所述凝膠和回收所述細胞的步驟包括：加入1mL濃度為1mg/mL的I型膠原酶溶液至所述凝膠，37℃搖床震蕩消化20分鐘，消化完后所得液體，經0.1g離心力離心，獲得細胞沉淀。