[發明專利]一種高效提取杜仲膠的方法

在審

• 申請號: 202210033286.8
• 申請日: 2022-01-12
• 公開（公告）號: CN114292417A
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發明（設計）人: 朱海華;王曉瑞;王鋆坦;平洋;張夢雪;郭碧珊;譚靜;王法云
• 申請（專利權）人: 河南省商業科學研究所有限責任公司;河南省科學院
• 主分類號: C08J3/00
• 分類號: C08J3/00;C08L7/00;C12N1/02;C12N1/38
• 代理公司: 北京眾達德權知識產權代理有限公司 11570
• 代理人: 張曉冬

本發明涉及杜仲膠提取技術領域，且公開了一種高效提取杜仲膠的方法，包括以下步驟：S1：土壤采樣，采集杜仲林下的腐殖質土，然后備用；S2：富集培養，將取自杜仲林下的土壤加入培養基中富集細菌、嗜熱菌及真菌；S3：涂布分離，富集結束后取100μL菌液利用平板涂布法將菌進行分離；S4：活化培養，將分離純化后的菌種放入活化培養基中進行活化培養，活化培養基包括基礎培養基和活化組分；S5：測定降解率。本發明能夠進行實時檢測，而且能夠提高檢測樣本，控制檢測時間和溫度，提高測定效率，通過優化酶活條件，能夠檢測到菌種提取的杜仲膠的最佳效率，從而提高杜仲膠的提取效果。

技術領域

本發明涉及杜仲膠提取技術領域，具體為一種高效提取杜仲膠的方法。

背景技術

杜仲膠是杜仲中存在的一類高分子化合物，杜仲的樹皮、葉及種皮中均含有豐富的杜仲膠，其葉含杜仲膠2％～4％、樹皮含6％～10％、種子含10％～18％。杜仲膠作為一種天然高分子材料，是國際上公認的能夠替代傳統三葉橡膠的膠源，仲膠絕緣性良好，耐酸堿、耐腐蝕、耐磨擦，可以硫化制得高彈性體，也可以控制交聯度產生新材料，在工業、國防、交通、航天、醫療等領域具有巨大的市場應用前景和價值，因此，杜仲膠作為及具發展潛力的優質天然橡膠資源。

現有的生物酶如纖維素酶、果膠酶等，經驗證不能有效的降解杜仲葉使維管結構暴露從而分離杜仲膠，不能充分的測定有效的杜仲膠分解提取的菌株，而且沒有掌握杜仲膠提取時更加高效的菌株優化培養條件，從而不能發揮菌種的最佳性能，因此提出一種高效提取杜仲膠的方法。

發明內容

(一)解決的技術問題

針對現有技術的不足，本發明提供了一種高效提取杜仲膠的方法，解決了不能充分的測定有效的杜仲膠分解提取的菌株，而且沒有掌握杜仲膠提取時更加高效的菌株優化培養條件，從而不能發揮菌種的最佳性能的問題。

(二)技術方案

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種高效提取杜仲膠的方法，包括以下步驟：

S1：土壤采樣，采集杜仲林下的腐殖質土，然后備用；

S2：富集培養，將取自杜仲林下的土壤加入培養基中富集細菌、嗜熱菌及真菌；

S3：涂布分離，富集結束后取100μL菌液利用平板涂布法將菌進行分離，挑取生長速度快、菌落數量占優勢、顏色及形態不同的菌株，進行菌株分離純化保藏；

S4：活化培養，將分離純化后的菌種放入活化培養基中進行活化培養，活化培養基包括基礎培養基和活化組分，基礎培養基組分包括：L-精氨酸12-23份，NaHPO42-9份，L-胱氨酸二鹽酸鹽1-7份，甘氨酸2.5-6份，L-組氨酸6-16份，酵母浸出粉3-12份，L-異亮氨酸5-11份，葡萄糖40-60份，L-賴氨酸鹽酸鹽2-8份；

S5：測定降解率，將活化培養后的菌株接種于裝有杜仲葉的三角瓶中，置于30℃、150r/min條件下培養，測定不同培養時間的降解率；

S6：酶活測定，對S4中活化培養得到的菌株發酵制備粗酶液，測定不同菌株發酵液中的果膠酶、纖維素酶、半乳糖醛酸活性，確定酶活較高的、可有效降解杜仲葉獲得杜仲膠的優良菌株；

S7：優化酶活條件：采用單因素試驗對發酵時間、發酵溫度、基質含水率、基質初始pH對杜仲膠發酵效果的影響進行測定，以確定最佳的發酵條件；

S8：提取杜仲膠，根據實驗得到的最佳酶活條件和優良菌株，大量富集培養菌株，把菌株投入杜仲葉片中對杜仲膠進行提取。

作為本發明再進一步的方案，所述S2中在進行富集時分別富集37℃細菌和55℃嗜熱菌每1-4天一次，循環富集培養2-4次，S2中在富集真菌時每10d一次，共富集3次。