[發明專利]一種利用模擬酪氨酸羥化酶制備的納米酶仿生合成左旋多巴的方法

有效

• 申請號: 202210028436.6
• 申請日: 2022-01-11
• 公開（公告）號: CN114380705B
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 劉文彬;尚祺;陳嬋
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: C07C227/16
• 分類號: C07C227/16;C07C229/36;B01J31/22;B01J31/28
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1.一種利用模擬酪氨酸羥化酶制備的納米酶仿生合成左旋多巴的方法，其特征在于所述方法包含如下步驟：

（1）配置100 mL 含有73.4-370.0 mM六水合氯化鐵和36.7-185.0 mM四水合氯化亞鐵溶液，通入惰性氣體并加熱至50-100 ℃，加入10-100 mL氨水，同時加入50 mL 10-110 mM乙二胺四乙酸二鈉絡合劑，100-500 rpm攪拌10-120 min，磁分離后得到黑色沉淀物；

（2）將步驟（1）中黑色沉淀物用去離子水清洗后在30-60 ℃真空干燥箱中干燥后得到Fe₃O₄@EDTA黑色粉末；

（3）將步驟（2）中10-500 mg 的Fe₃O₄@EDTA黑色粉末投入到100 mL 含有5-100 mM六水合硫酸亞鐵銨的Fe²⁺溶液中，通入惰性氣體，100-500 rpm攪拌10-120 min,磁分離后得到黑色沉淀物；

（4）將步驟（3）中黑色沉淀物用去離子水清洗后在30-60 ℃真空干燥箱中干燥后得到Fe₃O₄@EDTA-Fe²⁺納米酶；

（5）配置0.2 M pH 3-10的甘氨酸-鹽酸緩沖液，用該緩沖液配置1-10 mM酪氨酸、1-30mM抗壞血酸、2-60 mM雙氧水溶液，將步驟（4）所得的Fe₃O₄@EDTA-Fe²⁺納米酶作為催化劑，以抗壞血酸為還原劑，雙氧水為氧化劑依次加入底物酪氨酸溶液中，在溫度20-60 ℃、通氣速率0.1-1 L/min、10-100 rpm攪拌的條件下反應3-120 min后加入甘露醇淬滅劑并取樣檢測溶液中左旋多巴的濃度。

2.根據權利要求1所述的一種利用模擬酪氨酸羥化酶制備的納米酶仿生合成左旋多巴的方法，其特征在于步驟（1）所述的絡合劑選自乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸四鈉中的一種。

3.根據權利要求1所述的一種利用模擬酪氨酸羥化酶制備的納米酶仿生合成左旋多巴的方法，其特征在于步驟（1）、（3）所述的惰性氣體選自氮氣、氬氣中的一種。

4.根據權利要求1所述的一種利用模擬酪氨酸羥化酶制備的納米酶仿生合成左旋多巴的方法，其特征在于步驟（3）所述的Fe²⁺溶液選自六水合硫酸亞鐵銨、氯化亞鐵、硫酸亞鐵溶液中的一種。

5.根據權利要求1所述的一種利用模擬酪氨酸羥化酶制備的納米酶仿生合成左旋多巴的方法，其特征在于步驟（5）所述的緩沖液選自甘氨酸-鹽酸、醋酸、磷酸、甘氨酸、檸檬酸中的一種。

6.根據權利要求1所述的一種利用模擬酪氨酸羥化酶制備的納米酶仿生合成左旋多巴的方法，其特征在于步驟（5）所述的還原劑選自抗壞血酸,異抗壞血酸中的一種。

7.根據權利要求1所述的一種利用模擬酪氨酸羥化酶制備的納米酶仿生合成左旋多巴的方法，其特征在于步驟（5）所述的氧化劑選自雙氧水、氧氣中的一種。

8. 根據權利要求1所述的一種利用模擬酪氨酸羥化酶制備的納米酶仿生合成左旋多巴的方法，其特征在于步驟（5）中Fe₃O₄@EDTA-Fe²⁺納米酶的用量為0.1-10 mg/mL。

9.根據權利要求1所述的一種利用模擬酪氨酸羥化酶制備的納米酶仿生合成左旋多巴的方法，其特征在于步驟（5）所述的淬滅劑選自甘露醇、乙醇、組氨酸、三乙烯二胺中的一種。