[發(fā)明專利]一種防止IL-2衍生物蛋白復(fù)合體聚集及非共價連接蛋白亞基脫落的制劑

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210028126.4
• 申請日: 2022-01-11
• 公開（公告）號: CN114306576A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬鑫;張維;張秋磊;王雅媛;王國永
• 申請（專利權(quán)）人: 北京志道生物科技有限公司
• 主分類號: A61K38/20
• 分類號: A61K38/20;A61K47/02;A61K47/26;A61P29/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京市京軒律師事務(wù)所 11566
• 代理人: 林浩翔

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明公開了一種防止IL?2衍生物蛋白復(fù)合體聚集及非共價連接蛋白亞基脫落的制劑；較高的離子強(qiáng)度會促進(jìn)這一非共價連接蛋白復(fù)合體的解離，這一問題在患者輸液的過程中至關(guān)重要，因為常用的接近人體體液離子強(qiáng)度的注射液(如0.9％生理鹽水)的離子強(qiáng)度較高，足以使白細(xì)胞介素?2蛋白復(fù)合體的非共價連接蛋白復(fù)合體解離，本發(fā)明系統(tǒng)地研究了溶液的pH、緩沖鹽類型、表面活性劑及添加劑對蛋白復(fù)合體解離、膠體穩(wěn)定性和聚集的影響，減少了白細(xì)胞介素?2蛋白復(fù)合體的解離，同時保證了蛋白不形成聚集體。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種防止IL-2衍生物蛋白復(fù)合體聚集及非共價連接蛋白亞基脫落的制劑。

背景技術(shù)

治療性的非共價連接的蛋白復(fù)合體由于缺少共價鍵的交聯(lián)，在儲存和使用過程中容易發(fā)生非共價連接蛋白亞基的脫落，脫落之后的蛋白復(fù)合體的生物學(xué)活性會受到不良影響，所以必須盡量避免這一現(xiàn)象的發(fā)生。非共價連接的蛋白復(fù)合體依靠多種非共價相互作用連接在一起，包括但不限于疏水相互作用、離子鍵相互作用、氫鍵相互作用，各種相互作用受到溶液和制劑的影響不同，很難通過簡單的理論推導(dǎo)和分析評估蛋白復(fù)合體的非共價相互作用的大小，需要通過系統(tǒng)的實(shí)驗研究和分析得到針對特定蛋白復(fù)合體的最優(yōu)制劑，平衡各種因素對總體上非共價相互作用的影響。

現(xiàn)有的大部分治療性蛋白制劑針對的是共價連接的蛋白復(fù)合體，例如抗體，這類蛋白不存在非共價連接蛋白亞基脫落的問題，所以制劑開發(fā)過程中沒有考慮這個問題帶來的風(fēng)險。例如，表面活性劑會降低蛋白亞基之間的疏水相互作用，在生物制劑中廣泛用于防止蛋白聚集，但是對蛋白復(fù)合體而言，表面活性劑可能使蛋白復(fù)合體亞基之間的疏水相互作用降低，從而引起蛋白復(fù)合體亞基的解離。又例如，在共價連接的蛋白復(fù)合體制劑開發(fā)過程中，pH值接近蛋白的等電點(diǎn)會影響蛋白的膠體穩(wěn)定性，遠(yuǎn)離等電點(diǎn)通常增加蛋白的帶電，減小蛋白的聚集趨勢。然而在非共價連接蛋白復(fù)合體中，遠(yuǎn)離等電點(diǎn)通常增加蛋白的帶電，有可能增加亞基之間的電荷排斥力，而使得非共價連接蛋白亞基脫落。另外，由于非共價連接蛋白復(fù)合體中有多種非共價相互作用，包括但不限于疏水相互作用、離子鍵相互作用、氫鍵相互作用，各種相互作用在不同的蛋白復(fù)合體中的貢獻(xiàn)大小不同，同時，各種相互作用受到溶液和制劑的影響不同。白細(xì)胞介素-2衍生物，是一個治療性的非共價的蛋白復(fù)合體(專利申請公布號CN111018961A)。較高的離子強(qiáng)度會促進(jìn)這一非共價連接蛋白復(fù)合體的解離，這一問題在患者輸液的過程中至關(guān)重要，因為常用的，接近人體體液離子強(qiáng)度的注射液(如0.9％生理鹽水)的離子強(qiáng)度較高，足以使IL-2衍生物蛋白復(fù)合體的非共價連接蛋白復(fù)合體解離，現(xiàn)有的針對共價連接的蛋白復(fù)合體開發(fā)的制劑均沒有針對這一問題的解決方案。普遍使用的制劑和其他不同的非共價連接蛋白復(fù)合體使用的制劑難以借鑒，這些因素都限制了治療性非共價連接蛋白復(fù)合體的制劑開發(fā)和臨床應(yīng)用。

本發(fā)明針對如白細(xì)胞介素-2(IL-2)蛋白復(fù)合體，系統(tǒng)地研究了溶液的pH、緩沖鹽類型、離子強(qiáng)度、表面活性劑及添加劑對蛋白復(fù)合體解離、膠體穩(wěn)定性和聚集的影響。

本申請發(fā)現(xiàn)表面活性劑的加入，是防止IL-2衍生物蛋白復(fù)合體非共價連接蛋白亞基脫落的關(guān)鍵，可以保護(hù)該蛋白復(fù)合體在接近人體體液的離子強(qiáng)度下仍然以復(fù)合體的形式存在，為其臨床應(yīng)用創(chuàng)造了條件。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明提供了一種防止非供價連接的蛋白復(fù)合體聚集及非共價連接蛋白亞基脫落的制劑，特別是IL-2衍生物蛋白復(fù)合體。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明首先公開了該防止非供價連接的蛋白復(fù)合體聚集及非共價連接蛋白亞基脫落的制劑的組成，具體包括1-100mM緩沖劑，2-12％(w/v)滲透壓調(diào)節(jié)劑,0.01-0.1％(w/v)表面活性劑,pH.5-7.5；

優(yōu)選地，所述的緩沖劑為磷酸鹽緩沖液；

優(yōu)選地，所述的滲透壓調(diào)節(jié)劑為蔗糖；

優(yōu)選地，所述的表面活性劑為聚山梨酯80；