[發(fā)明專利]異戊烯基轉(zhuǎn)移酶突變體及生產(chǎn)大麻萜酚的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210027946.1
• 申請日: 2022-01-11
• 公開（公告）號: CN114350635A
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏文豪;陳賢情;李珍珠;逯曉云;王筱;劉詩夢;楊月;黃利輝;李子鶴;王千;江會鋒;王文
• 申請（專利權(quán)）人: 嘉興欣貝萊生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P7/22;C12R1/19
• 代理公司: 深圳紫藤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44570
• 代理人: 吳莉莉

本申請?zhí)峁┮环N異戊烯基轉(zhuǎn)移酶突變體及生產(chǎn)大麻萜酚的方法，通過將現(xiàn)有的異戊烯基轉(zhuǎn)移酶進(jìn)行定點(diǎn)突變，可幫助橄欖醇和焦磷酸香葉酯催化生成催化活性和純度較高的大麻萜酚，具有較高的生產(chǎn)應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種異戊烯基轉(zhuǎn)移酶突變體及生產(chǎn)大麻萜酚的方法。

背景技術(shù)

大麻素是指可以激活細(xì)胞中大麻素受體的一類化合物。目前已從大麻植物中分離出70多種大麻素，主要包括：四氫大麻酚(tetrahydrocannabinol，THC)、大麻萜酚(Cannabigerol，CBG)、大麻萜酚酸(Cannabigerolic Acid，CBGA)、大麻二酚(Cannabidiol，CBD)、大麻酚(Cannabinol，CBN)、大麻環(huán)萜酚(Cannabichromene，CBC)、四氫次大麻酚(Tetrahydrocannabivarin，THCV)、次大麻萜酚(Cannabigerovarin，CBGV)和次大麻萜酚酸(Cannabigerovarinic Acid，CBGVA)等。

無致幻副作用的大麻萜酚(Cannabigerol，CBG)在醫(yī)藥、食品、保健和化妝品等領(lǐng)域有重要的應(yīng)用價值。CBG與人體CB1和CB2受體結(jié)合后行使諸如抗腫瘤、抗炎癥、抗氧化、保護(hù)神經(jīng)、免疫調(diào)節(jié)及治療癌癥等功效。同時，CBG還對甲氧西林耐藥性的金黃色葡萄菌有殺菌效果。

近年來，CBG的生物合成及生產(chǎn)備受關(guān)注，目前已有技術(shù)利用異戊烯基轉(zhuǎn)移酶(NphB)催化，并通過橄欖醇(Olivetol)和焦磷酸香葉酯(geranyl pyrophosphate，GPP)來合成CBG，異戊烯基轉(zhuǎn)移酶的作用是將異戊烯基轉(zhuǎn)移到另一個基團(tuán)，但是現(xiàn)有的異戊烯基轉(zhuǎn)移酶存在催化活性以及純度不高的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本申請?zhí)峁┮环N異戊烯基轉(zhuǎn)移酶突變體及生產(chǎn)大麻萜酚的方法，旨在利用該異戊烯基轉(zhuǎn)移酶突變體生成催化活性以及純度較高的大麻萜酚。

第一方面，本申請?zhí)峁┮环N異戊烯基轉(zhuǎn)移酶突變體，所述異戊烯基轉(zhuǎn)移酶突變體的序列是對應(yīng)于SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的部分位點(diǎn)被取代，所述部分位點(diǎn)包括：A232、G286、Y288、Q161、S214、V49、S177、F107以及H290中的至少一種。

可選的，所述A232被取代為蘇氨酸T。

可選的，所述G286被取代為蘇氨酸T或丙氨酸A中的任一種。

可選的，所述部分位點(diǎn)包括：G286和Y288。

可選的，所述S177被取代為甘氨酸G。

可選的，所述V49被取代為半胱氨酸C或酪氨酸Y中的任一種。

可選的，所述F107被取代為天冬氨酸D。

可選的，所述H290被取代為天冬氨酸D或半胱氨酸C中的任一種。

可選的，對應(yīng)于SEQ ID NO.1，所述部分位點(diǎn)包括：

G286和Y288；

Q161、S214、Y288和S177；

Q161、S214、Y288和F107；

Q161、S214、Y288、V49和H290；以及

Q161、S214、Y288和G286中的一組或多組的組合。

可選的，對應(yīng)于SEQ ID NO.1，所述部分位點(diǎn)發(fā)生以下取代：

A232T；

G286T和Y288A；

G286T和Y288K；