[發明專利]一種間充質干細胞冷藏保護液及保存方法

有效

• 申請號: 202210026512.X
• 申請日: 2022-01-11
• 公開（公告）號: CN114403127B
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發明（設計）人: 修冰水;王宏;李帥民;劉世紅
• 申請（專利權）人: 北京中衛醫正科技有限公司;北京中衛醫正腫瘤醫學研究有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 蘇州中合知識產權代理事務所(普通合伙) 32266
• 代理人: 劉召民

本發明提供了一種間充質干細胞冷藏保護液及保存方法，冷藏保護液包括如下組分：海藻糖、低分子肝素鈣注射液、右旋糖酐40氯化鈉注射液、人血白蛋白、復方電解質注射液。該冷藏保護液不含有DMSO等毒理成分，成分均為國家批準的注射級藥輔材料，可直接靜脈回輸。本發明采用預冷式冷藏保存方法，能使細胞和保護液快速進入低溫平衡狀態而減少細胞損害，可用于間充質干細胞4℃冷藏條件下的長時間保存，并便于運輸，減少了干細胞產品對地域的依賴性。

技術領域

本發明屬于干細胞生物學技術領域，尤其涉及一種間充質干細胞冷藏保護液及保存方法。

背景技術

間充質干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是來源于發育早期中胚層的具有高度自我更新能力和多向分化潛能的多能干細胞，廣泛存在于全身多種組織中，可在體外培養擴增，并能在特定條件下分化成神經細胞，成骨細胞，軟骨細胞，肌肉細胞及脂肪細胞等，這些特性使其在組織損傷性疾病和免疫性疾病的治療中有重要的應用價值。

干細胞制備技術和治療方案具有多樣性、復雜性和特殊性。干細胞不同于其它藥品，在體外很難長時間保持存活，而干細胞的活率和活性會影響到患者的醫療安全和療效。在實際應用中，制備的干細胞制劑常常不能立即應用，因此合適的保存溶液和放置時間對細胞活性以及細胞活率影響很大，也是造成干細胞臨床應用限制的重要因素。

干細胞保存技術臨床上應用比較成熟的有兩類：一是冷凍保存，包括液氮-196℃保存和-80℃冰箱保存。冷凍保存即零下溫度保存。冷凍保存干細胞安全可靠，在液氮-196℃條件下還可以長久保存。但是冷凍保存的干細胞在臨床上不能直接使用，細胞需要解凍，并重懸于細胞輸注液中使用。而細胞冷凍和解凍過程需要非常專業的操作，涉及加入冷凍保護劑并分裝、降溫、儲存、熔化、清洗、回輸等階段，在此過程中的每一個環節都會造成細胞損傷和死亡。冷凍保存的細胞使用前需增加無菌潔凈環境下清洗及終產品檢測環節，一般臨床機構難以實現上述操作，限制了干細胞的臨床使用。二是冷藏保存，即4℃非冷凍保存。4℃保存干細胞，方法簡單，回輸前無需解凍，只需細胞復溫后即可直接回輸使用。4℃保存干細胞，細胞不經過冷凍損傷，細胞中不含DMSO等冷凍保護劑成分，無相關不良反應。但是目前冷藏保存的細胞，保存時間很短，通常需要在12小時以內使用，在臨床應用上也受到很大限制。

發明內容

針對上述技術問題，本發明提供了一種間充質干細胞冷藏保護液及保存方法，該冷藏保護液不含有DMSO等毒理成分，成分均為國家批準的注射級藥輔材料，可直接靜脈回輸。本發明采用預冷式冷藏保存方法，能使細胞和保護液快速進入低溫平衡狀態而減少細胞損害，可用于間充質干細胞4℃冷藏條件下的長時間保存，并便于運輸，減少了干細胞產品對地域的依賴性。該冷藏保護液及保存方法可用于間充質干細胞4℃冷藏條件下的長時間保存。該干細胞長時間保存方法無需細胞凍存操作，減少細胞凍存環節造成的細胞損傷，并能避免臨床上因干細胞冷凍保護劑成分引起的不良反應。細胞存活率高，且可直接靜脈回輸。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種間充質干細胞冷藏保護液，所述冷藏保護液包括如下組分：海藻糖、低分子肝素鈣注射液、右旋糖酐40氯化鈉注射液、人血白蛋白、復方電解質注射液。

進一步地，所述冷藏保護液包括如下組分：

優選地，所述冷藏保護液包括如下組分：

優選地，所述冷藏保護液中的低分子肝素鈣注射液的型號為10250AXaIU/ml。

本發明的目的還在于提供一種間充質干細胞冷藏保存方法，基于上述冷藏保護液實現，包括如下步驟：

(1)將冷藏保護液過濾除菌，濾液置于4℃預冷；

優選地，采用0.22μm過濾除菌。