[發明專利]豬繁殖和呼吸障礙綜合癥病毒快速檢測試紙條及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202210024230.6
• 申請日: 2022-01-15
• 公開（公告）號: CN114316038B
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發明（設計）人: 孫統威;徐慧珍;周晶晶;查銀河
• 申請（專利權）人: 杭州恒奧科技有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N5/20;C07K14/08;G01N33/569;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/543
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本發明公開了一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒單克隆抗體，所述的單克隆抗體3的的重鏈可變區序列如SEQ?ID?NO.2所示，輕鏈可變區序列如SEQ?ID?NO.3所示；所述的單克隆抗體8的的重鏈可變區序列如SEQ?ID?NO.4所示，輕鏈可變區序列如SEQ?ID?NO.5所示；所述的單克隆抗體3結合的抗原表位位于優化后的PRRSV?GP5蛋白的aa34?aa48位；所述的單克隆抗體8的抗原表位位于優化后的PRRSV?GP5蛋白的aa96?aa109位。本發明還公開了一種用于檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒的試劑盒，所述試劑盒包括有效量的單克隆抗體3和單克隆抗體8以及配套的檢測試劑。本發明制備的單克隆抗體具有良好的特異性和敏感性，適用于制備不同的豬繁殖與呼吸綜合征病毒診斷試劑，如膠體金、ELISA、化學發光等檢測試劑盒。

技術領域

本發明屬于病毒疫病診斷技術領域，具體涉及豬繁殖和呼吸障礙綜合癥病毒快速檢測試紙條及其制備方法和應用。

背景技術

豬繁殖和呼吸障礙綜合癥(Porcine?Reproductive?and?Respiratory?Syndrome，簡稱PRRS)，俗稱藍耳病(Blue?Ear?Disease)，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的一種嚴重危害養豬業的傳染病。PRRS可導致母豬出現繁殖障礙及仔豬出現嚴重呼吸道疾病，是一種嚴重影響經濟效益的豬傳染病。

PRRSV為單股正鏈RNA(大小約15kb)，不分節段病毒，該病毒屬動脈炎病毒科動脈炎病毒屬。PRRSV是一種有囊膜的病毒，似球狀，直徑45～65nm，囊膜表面有纖突，相對平滑。PRRSV可在豬肺泡巨噬細胞上生長(PAM細胞)，在MARC-145細胞上培養可出現細胞圓縮、聚集和崩解等明顯的細胞病變(CPE)。PRRSV的RNA其5‘端具有帽子結構(5‘-Cap)，3’端具有多聚腺嘌呤核苷酸尾結構(3’-polyA)，共含有9個開放閱讀框(ORF)，分別為1a、1b、2a、2b、3、4、5、6、7。相鄰ORF間有重疊區域。PRRSV的主要結構蛋白包括GP5蛋白(囊膜糖蛋白)、M蛋白(基質蛋白)、N蛋白(核衣殼蛋白)，次要結構蛋白則有GP2、GP3、GP4等。

GP5蛋白由ORF5編碼，約26～30kD，是一個糖基化蛋白，含有4個糖基化位點，有6個抗原決定簇。有證據表明GP5在PRRSV的抗體識別過程中起關鍵作用，是誘導機體產生中和抗體的主要結構蛋白，是公認的PRRSV的主要保護性抗原，也是PRRSV診斷的靶標抗原之一。

發明內容

為了彌補現有技術的不足，本發明的目的之一，提供一種PRRSV?GP5蛋白的單克隆抗體及其制備方法；本發明的目的之二，提供了一種使用本發明制備的GP5蛋白和單克隆抗體制備豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢測試劑盒。

因此，本發明一方面公開了一種一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒單克隆抗體，所述的單克隆抗體均能特異性結合PRRSV?GP5蛋白；所述的單克隆抗體3的的重鏈可變區序列如SEQ?ID?NO.2所示，所述的單克隆抗體3的輕鏈可變區序列如SEQ?ID?NO.3所示；所述的單克隆抗體8的的重鏈可變區序列如SEQ?ID?NO.4所示，所述的單克隆抗體8的輕鏈可變區序列如SEQ?ID?NO.5所示。

優選地，本發明所述的單克隆抗體3結合的抗原表位位于優化后的PRRSV?GP5蛋白的aa34-aa48位，所述的優化后的PRRSV?GP5蛋白的aa34-aa48位氨基酸序列為ETFVIFPVLTHIVSY。

優選地，本發明所述的單克隆抗體8的抗原表位位于優化后的PRRSV?GP5蛋白的aa96-aa109位，所述的優化后的PRRSV?GP5蛋白的aa96-aa109位氨基酸序列為LAKNCMSWRYSCTR。

另一方面，本發明還公開了一種制備所述的單克隆抗體的方法，所述方法包括以下步驟：1)PRRSV?GP5蛋白的制備；2)特異性表達抗PRRSV?GP5蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞的制備；3)使用步驟2)制備的雜交瘤細胞制備小鼠腹水，從腹水中純化抗PRRSV?GP5蛋白單克隆抗體。