[發明專利]一種葡萄糖檢測反應液以及細胞液葡萄糖含量檢測方法

在審

• 申請號: 202210021606.8
• 申請日: 2022-01-10
• 公開（公告）號: CN114354332A
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發明（設計）人: 李浩強;唐慧嫻;王一茹;董宇童
• 申請（專利權）人: 杭州皓陽生物技術有限公司
• 主分類號: G01N1/38
• 分類號: G01N1/38
• 代理公司: 紹興上虞誠知創專利代理事務所(普通合伙) 33354
• 代理人: 馮如杰

本發明公開了一種細胞液葡萄糖含量檢測方法，包括以下步驟：a、在稀釋板中加緩沖劑，細胞液樣品，標準品；b、配制葡萄糖檢測反應液；c、在檢測板中的加入葡萄糖檢測反應液；d、酶標儀檢測細胞液樣品糖濃度，計算細胞液樣品葡萄糖含量；這樣的方法在細胞培養過程中用少量細胞液樣品即可完成葡萄糖含量檢測，無需進行離心等前處理工作，簡化檢測步驟；測定用酶標儀即可完成，操作簡便；同時在配置葡萄糖檢測反應液的時候采用混合裝置能提高混合效率；進一步提高了檢測的效率，有利于產量化的檢測。

技術領域

本發明屬于細胞液葡萄糖含量檢測技術領域，尤其是涉及一種細胞液葡萄糖含量檢測方法。

背景技術

葡萄糖(Glucose)，有機化合物，分子式C6H12O6，是自然界分布最廣且最為重要的一種單糖。葡萄糖在生物學領域具有重要地位，是活細胞的能量來源和新陳代謝中間產物，也是細胞的主要供能物質。在細胞培養，尤其是批次補料實驗過程中，葡萄糖的監測及及時補充是維持細胞存活的基礎。

目前實驗室細胞液葡萄糖含量主要由紫外分光光度計法或全自動生化分析儀檢測，檢測原理主要基于葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法、葡萄糖氧電極法等。儀器檢測雖然自動化程度高，較為方便快捷，但受限于儀器通量，難以同時完成大批量細胞液樣品檢測。此外，利用生化分析儀檢測Glucose受儀器限制，需要配套的試劑、標定物及質控物，單位細胞液樣品成本較高。紫外法雖然成本相對較低，但需要細胞液樣品量相對較多，不利于小體積細胞培養使用。

這些現有技術的缺點在于：檢測成本較高，細胞液樣品量大，不能同時完成大批量細胞液樣品檢測，使用受儀器、耗材、資源等限制；市場需要一種在細胞培養過程中用少量細胞液樣品即可快捷、準確、大量地完成葡萄糖含量檢測的反應液和檢測方法，本發明解決這樣的問題；

在進行檢查前需要進行對反應液的混合處理，現有的技術中會將試管放在酶標板上，然后將酶標板放在晃動機上進行晃動混合；但是在晃動的時候由于晃動幅度、方向、速度單一，反而導致混合液混合效果降低；同時由于慣性的關系，晃動的時候會導致試管內的液體沾到試管蓋上，導致浪費反應液。

發明內容

本發明為了克服現有技術的不足，提供一種細胞液葡萄糖含量檢測方法。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：一種細胞液葡萄糖含量檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：

a、在稀釋板中加200ul緩沖劑和20ul細胞液樣品，標準品；

b、分別將顯色劑、GOD、HRP和緩沖劑注入試管內；通過混合機進行混合，首先將多根試管插入第一混合板內，然后啟動混合輥開始旋轉；首先會驅動第一混合板在主體內壁向下移動，然后試管下端進入第二混合板內，啟動混合裝置對試管內的混合液進行混合；所述混合裝置包括設于所述第二混合板內多個混合孔、設于所述混合孔內的旋轉環、設于所述旋轉環內的夾持機構、設于主體底部的主動斜齒輪、連接主動斜齒輪和混合輥的第一同步帶、設于所述第二混合板內的驅動腔、設于所述驅動腔內的驅動機構；當試管下端進入到第二混合板內的時候，混合輥的繼續旋轉會帶動主動斜齒輪開始旋轉，然后驅動機構開始啟動；啟動的同時夾持機構對試管底部進行對接，然后旋轉環開始旋轉，對試管底部進行晃動，從而進行混合；

c、在檢測板中的每個孔中加入100ul葡萄糖檢測反應液，再在含有葡萄糖檢測反應液的孔中加入20ul細胞液樣品，標準品；

d、含有細胞液樣品，標準品的反應液避光放置45分鐘，在酶標儀上用405nm的吸光波長檢測細胞液樣品糖濃度，作出標準曲線，計算細胞液樣品葡萄糖含量。