[發(fā)明專利]一種快速篩選抗薔薇長(zhǎng)管蚜月季種質(zhì)資源的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210021091.1
• 申請(qǐng)日: 2022-01-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114292949B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邱顯欽;晏慧君;陳敏;周寧寧;王慧純;李慧敏;孫建麗;高鵬華;郭艷紅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 云南凌云律師事務(wù)所 53207
• 代理人: 康珉

一種快速篩選抗薔薇長(zhǎng)管蚜月季種質(zhì)資源的方法，該方法包括抗蚜標(biāo)記專用引物RhWRKY14，薔薇長(zhǎng)管蚜的接種，熒光定量RTFQ?PCR試驗(yàn)，以及抗蚜材料的等級(jí)劃分。該方法僅用1天時(shí)間和少量植物材料，即可準(zhǔn)確高效地在我國(guó)各地鑒定出對(duì)薔薇長(zhǎng)管蚜具有抗蟲(chóng)性的月季種質(zhì)資源，節(jié)約成本、省工省時(shí)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬木本花卉抗蟲(chóng)育種技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及不同月季種質(zhì)資源對(duì)薔薇長(zhǎng)管蚜的抗性鑒定和篩選。

背景技術(shù)

月季(Rosa?hybrida)是薔薇科(Rosaceae)薔薇屬(Rosa?L.)植物，栽培廣泛，是全球第一大切花。在我國(guó)，云南省是月季切花的主產(chǎn)區(qū)之一。

危害月季的蚜蟲(chóng)主要包括薔薇長(zhǎng)管蚜(Macrosiphum?rosae)、月季長(zhǎng)管蚜(Macrosiphum?rosivorum)、桃蚜(Myzuspe?rsicae)、月季冠蚜(Myzaphis?rosarum)、棉蚜(Aphis?gossypii)等，其中薔薇長(zhǎng)管蚜最為常見(jiàn)且危害嚴(yán)重，其常聚集于月季嫩梢部位刺吸汁液，進(jìn)而使花卉長(zhǎng)勢(shì)衰弱，同時(shí)增加其他病蟲(chóng)害的感染率。隨著切花月季生產(chǎn)規(guī)模的不斷擴(kuò)大，蚜蟲(chóng)對(duì)月季的危害日漸嚴(yán)重，目前，主要是采用施用農(nóng)藥對(duì)其進(jìn)行防治，但這樣不僅增加了生產(chǎn)商的生產(chǎn)成本，而且對(duì)環(huán)境造成了污染。因此，選育和種植抗蚜月季新品種是今后綠色生產(chǎn)的關(guān)鍵。

選育月季抗蚜新品種的前提，就是要應(yīng)用準(zhǔn)確高效的抗蚜鑒定和篩選方法，對(duì)大量的月季親本材料和大量的月季雜交后代，進(jìn)行抗蚜鑒定和篩選工作，以期縮短抗蚜育種的周期。迄今為止，國(guó)內(nèi)外尚未有利用分子標(biāo)記技術(shù)篩選抗蚜月季種質(zhì)資源的研究報(bào)道。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)于抗蚜植物的傳統(tǒng)篩選鑒定方法主要是：將蚜蟲(chóng)接種到鑒別寄主植物上，經(jīng)過(guò)一定產(chǎn)蚜周期，記錄和統(tǒng)計(jì)寄主葉片上產(chǎn)蚜數(shù)量變化情況，以此鑒別出不同抗蚜等級(jí)的植物材料。

基于我們前期對(duì)月季薔薇長(zhǎng)管蚜對(duì)月季資源各個(gè)階段的危害特點(diǎn)、月季抗蚜基因的克隆和測(cè)序、月季抗蚜基因分子標(biāo)記開(kāi)發(fā)等多方面開(kāi)展了大量的科研工作，發(fā)現(xiàn)結(jié)合現(xiàn)代分子生物技術(shù)對(duì)抗蚜材料進(jìn)行鑒定篩選，不僅能準(zhǔn)確地鑒定和篩選出抗蚜材料，而且能縮短鑒定周期，同時(shí)還具有操作方便、省工省材等優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種能夠快速篩選抗薔薇長(zhǎng)管蚜的月季種質(zhì)資源的方法，以便解決目前抗蚜植物的傳統(tǒng)篩選鑒定方法存在的費(fèi)事費(fèi)力和鑒別不精準(zhǔn)的缺陷。

本文本以下所使用的術(shù)語(yǔ)：

抗蚜：抗薔薇長(zhǎng)管蚜。

蚜蟲(chóng)：薔薇長(zhǎng)管蚜。

熒光定量RTFQ-PCR技術(shù)：實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)，英文Real-TimeFluorescence?Quantitative?Polymerase?Chain?Reaction，簡(jiǎn)稱：RTFQ-PCR。

UBC基因：泛素結(jié)合蛋白(UBiquitin?Conjugating?protein)基因。

RhWRKY14基因：月季七肽(WRKYGQK)保守轉(zhuǎn)錄因子基因(Rosa?hybrida?probableWRKY?transcription?factor?40Locus?Chromosome?2，RhWRKY14)

本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

1.一種利用熒光定量RTFQ-PCR技術(shù)快速篩選抗薔薇長(zhǎng)管蚜月季種質(zhì)資源的專用引物RhWRKY14，所述專用引物RhWRKY14由RhWRKY14上游引物和RhWRKY14下游引物組成，所述RhWRKY14上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，RhWRKY14下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。