[發明專利]一種蟬棒束孢孢子粉的保藏方法

有效

• 申請號: 202210016323.4
• 申請日: 2022-01-07
• 公開（公告）號: CN114214199B
• 公開（公告）日: 2023-08-22
• 發明（設計）人: 梁月;孫林;王彩懿
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12N1/14;C12N3/00;C12R1/645
• 代理公司: 北京盛詢知識產權代理有限公司 11901
• 代理人: 張先蓉

本發明公開了一種蟬棒束孢孢子粉的保藏方法，屬于微生物菌種保藏技術領域。該方法包括以下步驟：獲取蟬棒束孢的孢子粉，將所述蟬棒束孢以孢子粉形式密封保藏于?80℃超低溫或4℃低溫下。本發明以孢子粉的形式保藏蟬棒束孢，將孢子粉置于不同溫度環境中，檢測時間周期等保藏條件，結合菌絲生長、孢子萌發、菌懸液中菌絲體生物量及其對柞蠶蛹的侵染能力等標準進行評定，最終得到將孢子粉保藏于?80℃超低溫或4℃低溫下，可以保持活性超過24個月，且具有侵染昆蟲的活性，是進行長期保藏的最佳方案，這為填補蟬棒束孢的菌種保藏領域的技術空白，以及提供優質、穩定的蟬棒束孢種質資源具有重要意義。

技術領域

本發明涉及微生物菌種保藏技術領域，特別是涉及一種蟬棒束孢孢子粉的保藏方法。

背景技術

蟬棒束孢(Isaria?cicadae)屬于子囊菌門、糞殼菌綱、肉座菌目、蟲草科、棒束孢屬的真菌。從古至今，多數醫藥典籍廣為承認的名稱唯有“蟬花”之名，且其能最準確而形象地概括了這種蟲草的特征，是我國一種傳統珍貴中藥材，使用歷史悠久。蟬棒束孢相比冬蟲夏草的生長環境而言，分布較為廣泛，主要出現在我國長江以南，包括四川、江蘇、浙江、福建、安徽、廣東和云南等省份。野生及人工培養的蟬棒束孢均具有豐富的營養成分，從中可以分離提取出許多有利于人體健康的活性成分如氨基酸、腺苷、麥角甾醇以及蟲草素等。

蟬棒束孢的人工培養技術及生防作用等方面研究已經廣泛開展。但在生產實踐中，栽培技術人員遇到的一個普遍性的難題是人工分離的菌種在培養基上容易發生生產性狀的變異，即通常所說的菌種退化現象，并且退化的菌種的侵染能力會有所下降，且蟬棒束孢具有高安全性、產孢量大的優勢，是一種廣譜并對害蟲有較高致病力的蟲生真菌很適合做殺蟲劑來防治有害昆蟲，但蟬棒束孢的孢子制劑像其它生防真菌一樣，由于擊倒害蟲速度較慢、對濕度的依賴性、孢子不耐貯存等限制性因素，使其在生產應用上受到很大的限制。因此通過保藏手段使孢子能夠有效儲藏并提高其侵染能力顯得尤為重要。

發明內容

本發明的目的是提供一種蟬棒束孢的孢子粉的保藏方法，以解決上述現有技術存在的問題，通過以孢子粉形式保藏蟬棒束孢的菌種，在-80℃和4℃冷藏條件孢子可保持活性超過24個月，且具有侵染昆蟲的能力，是適合長期保藏蟬棒束孢菌種的優質保藏方法。

為實現上述目的，本發明提供了如下方案：

本發明提供一種蟬棒束孢孢子粉的保藏方法，包括以下步驟：

獲取蟬棒束孢的孢子粉，將所述蟬棒束孢以孢子粉形式密封保藏于-80℃超低溫或4℃低溫下。

優選的是，獲取蟬棒束孢的孢子粉的方法包括以下步驟：

(1)將所述蟬棒束孢接種固體改良馬鈴薯葡萄糖培養基上，培養至長出菌絲；所述固體改良馬鈴薯葡萄糖培養基包括以下重量份組分：馬鈴薯200份、葡萄糖20份、蛋白胨3份、七水硫酸鎂1份、磷酸二氫鉀2份、維生素B?0.025份、瓊脂16份以及水1000份；

(2)將所述菌絲和孢子轉至液體改良馬鈴薯葡萄糖培養基，培養獲取菌懸液；所述液體改良馬鈴薯葡萄糖培養基為所述固體改良馬鈴薯葡萄糖培養基中不添加瓊脂；

(3)將所述菌懸液接種于小麥培養基，培養后獲取蟬棒束孢的孢子粉；所述小麥培養基包括以下重量份的組分：小麥15份和液體改良馬鈴薯葡萄糖培養基22.5份。

優選的是，步驟(1)中，培養條件為23℃黑暗培養3d后，轉至光照條件下繼續培養，培養至菌絲生長接觸培養器皿的內壁。

優選的是，步驟(2)中，培養條件為23℃、150rpm條件下培養3d，獲取菌懸液。

優選的是，步驟(3)中，培養條件為所得菌懸液按照接種量5％接種于所述小麥培養基，23℃黑暗培養3d后，再光照培養17d，然后收取蟬棒束孢的孢子粉。

本發明還提供所述的保藏方法在防止蟬棒束孢退化上的應用。