[發明專利]一種烯醇化酶單克隆抗體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202210011886.4
• 申請日: 2022-01-07
• 公開（公告）號: CN114426581B
• 公開（公告）日: 2023-02-03
• 發明（設計）人: 閆亞平;郝文斌;穆瑜;張亞劍;王璐;劉龍月;李科
• 申請（專利權）人: 陜西脈元生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C12N15/85;C12N5/10;C12P21/08;G01N33/573;G01N33/577
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明涉及一種烯醇化酶單克隆抗體及其制備方法和應用，屬于生物技術領域。本發明所述單克隆抗體12D11包括輕鏈和重鏈，所述輕鏈屬于kappa，所述重鏈屬于IgG1，所述輕鏈的可變區的3個互補決定區的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.1～3所示，所述重鏈的可變區的3個互補決定區的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.4～6所示。本發明所述烯醇化酶單克隆抗體特異性好、效價高、純度高，能夠特異性檢測ENO1、ENO2和ENO3。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種烯醇化酶單克隆抗體及其制備方法和應用。

背景技術

烯醇化酶(enolase)是生物體內糖酵解過程中的關鍵酶，在脊椎動物中，烯醇化酶存在3種同功酶:α，β，γ。α-enolase(ENO1)又稱為非神經元烯醇化酶(non-neuralenolase，NNE)，在許多組織均存在；β-enolase(ENO3)又稱為肌肉特異性烯醇化酶(muscle-specificenolase，MSE)、骨胳肌enolase(skeletalmuscleenolase)，幾乎僅見于肌肉組織；γ-enolase(ENO2)又稱為神經元烯醇化酶(neuraleno-lase)、神經元特異性烯醇化酶(neuron-specificeno-lase，NSE)，主要存在于神經元和神經內分泌組織。Enolase的活性形式均為二聚體，即由兩個亞基組成，目前已知有5種形式的組合:αα，ββ，γγ，αβ，αγ。

α-enolase(ENO1)是一種多功能蛋白，除了作為糖酵解反應的限速酶外，還參與細胞的其他生物學活動。細胞的生命活動時刻需要能量的供給，α-enolase正是通過調節細胞的產能過程，維持細胞ATP水平，保證細胞的存活及其生理功能的執行。α-enolase作為一種能量代謝過程中重要的酶，其表達水平和活性也發生適應性變化，以滿足細胞不同狀態下的需求。另外，α-enolase作為一種自身抗原，既是胞漿酶，又可表達于腎臟、血管等組織及一些細胞如內皮細胞膜或與細胞表面結合。α-enolase發生氨基甲酰鳥氨酸化，并刺激機體產生特異性自身抗體，從而引發類風濕性關節炎的慢性炎癥反應。自身免疫性視網膜病變患者體內存在抗α-enolase抗體，此外，α-enolase也存在于人呼吸道上皮細胞中，作為自身抗原誘導自身免疫反應，造成呼吸道上皮細胞損傷，誘發氣道炎癥反應。另外，α-enolase作為一種致免疫性的腫瘤相關抗原，與肺癌等的預后差和腫瘤的惡性度高相關，這些均提示α-enolase可能作為預測腫瘤進展程度的一個生物學標志物。

烯醇化酶2(ENO2)，又稱神經元特異性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)，NSE主要存在于神經元和神經內分泌細胞的胞質。神經元特異性烯醇化酶是一種普遍存在于生物體細胞質中能敏感反映神經元損傷的神經系統特異糖酵解酶。

NSE最早是作為小細胞肺癌的腫瘤標記物，但近年來越來越多的研究結果表明NSE可作為各類神經元損傷的特異性標志。在腦血管病，尤其在腦出血方面，越來越受到人們的重視。測定NSE在腦出血的診斷，判斷疾病嚴重程度，估計預后和指導治療等方面具有重要意義。

在腦損傷性疾病中，神經細胞中的NSE透過血腦屏障釋放入腦脊液及血液中，引起血清及腦脊液中NSE水平升高，不同程度及不同性質的腦損傷NSE釋放的量及速度亦不相同，且在廣泛的腦損傷和越來越嚴重的繼發性腦損傷患者中NSE持續升高，因此，其水平不僅能反映原發性腦損傷的程度，而且能反映繼發性腦損傷的進展。檢測血清NSE水平可為顱腦損傷和腦出血等腦血管性疾病診斷及預后判斷提供一種新的手段。NSE作為神經重癥監護的長期預后生物標志物和治療指標具有極好的潛力。

肌肉特異性烯醇化酶β-enolase(ENO3)，是一種鑒別肌肉損傷的marker。