[發明專利]一種ENO2單克隆抗體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202210011858.2
• 申請日: 2022-01-07
• 公開（公告）號: CN114478783B
• 公開（公告）日: 2022-11-29
• 發明（設計）人: 閆亞平;郝文斌;張亞劍;穆瑜;王璐;劉龍月;李科
• 申請（專利權）人: 陜西脈元生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C12N15/13;C12N15/85;C12N5/10;C12P21/08;G01N33/573;G01N33/577
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 蘇士瑩

本發明提供了一種ENO2單克隆抗體及其制備方法和應用，涉及單克隆抗體技術領域。本發明提供了所述單克隆抗體11D7的重鏈和輕鏈的可變區的互補決定區序列，基于所述序列可將可變區序列構建到抗體表達載體上，轉染細胞表達獲得重組單克隆抗體。本發明得到的單克隆抗體載體易于保存，易于抗體生產過程質量控制；也方便對抗體做一系列的改造，更深入的研究，更廣泛的應用。

技術領域

本發明屬于單克隆抗體技術領域，具體涉及一種ENO2單克隆抗體及其制備方法和應用。

背景技術

烯醇化酶是生物體內糖酵解過程中的關鍵酶，在脊椎動物中，烯醇化酶(enolase)存在3種同功酶:α、β和γ。α-enolase(ENO1)又稱為非神經元烯醇化酶(non-neuralenolase,NNE)，在許多組織均存在；β-enolase(ENO3)又稱為肌肉特異性烯醇化酶(muscle-specificenolase,MSE)、骨胳肌enolase(skeletalmuscleenolase)，幾乎僅見于肌肉組織；γ-enolase(ENO2)又稱為神經元烯醇化酶(neuraleno-lase)、神經元特異性烯醇化酶(neuron-specificeno-lase,NSE)，主要存在于神經元和神經內分泌組織。Enolase的活性形式均為二聚體，即由兩個亞基組成，目前已知有5種形式的組合：αα、ββ、γγ、αβ和αγ。

烯醇化酶2(ENO2)又稱NSE，NSE主要存在于神經元和神經內分泌細胞的胞質。神經元特異性烯醇化酶是一種普遍存在于生物體細胞質中能敏感反映神經元損傷的神經系統特異糖酵解酶。

NSE最早是作為小細胞肺癌的腫瘤標記物，但近年來越來越多的研究結果表明NSE可作為各類神經元損傷的特異性標志。在腦血管病，尤其在腦出血方面，越來越受到人們的重視。測定NSE在腦出血的診斷、判斷疾病嚴重程度、估計預后和指導治療等方面具有重要意義。

在腦損傷性疾病中，神經細胞中的NSE透過血腦屏障釋放入腦脊液及血液中，引起血清及腦脊液中NSE水平升高，不同程度及不同性質的腦損傷NSE釋放的量及速度亦不相同，且在廣泛的腦損傷和越來越嚴重的繼發性腦損傷患者中NSE持續升高，因此，其水平不僅能反映原發性腦損傷的程度，而且能反映繼發性腦損傷的進展。檢測血清NSE水平可為顱腦損傷和腦出血等腦血管性疾病診斷及預后判斷提供一種新的手段。NSE作為神經重癥監護的長期預后生物標志物和治療指標具有極好的潛力。

但是目前關于NSE的檢測，傳統的產單克隆抗體的雜交瘤細胞不易保存，時間過長會出現細胞狀態變差，甚至難以復蘇，產生抗體量降低，并且抗體的序列未知，無法對抗體做更深入的研究。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種ENO2單克隆抗體及其制備方法和應用，特所述單克隆抗體異性好、效價高，并且基于得到所述單克隆抗體構建得到的表達載體和重組細胞，易于保存和改造。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種ENO2單克隆抗體11D7，所述單克隆抗體11D7包括重鏈和輕鏈；

所述輕鏈的可變區包括3個互補決定區，氨基酸序列如SEQ ID NO.1～SEQ IDNO.3所示；

所述重鏈的可變區包括3個互補決定區，氨基酸序列如SEQ ID NO.4～SEQ IDNO.6所示。

優選的，所述單克隆抗體11D7的輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。

優選的，編碼所述輕鏈可變區的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；

編碼所述重鏈可變區的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。