[發明專利]一種A型口蹄疫病毒結構蛋白VP2的抗體m12、制備方法及應用

有效

• 申請號: 202210011200.1
• 申請日: 2022-01-05
• 公開（公告）號: CN114276446B
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: 鄭海學;楊洋;茹毅;秦曉東;張偉;楊帆;曹偉軍;朱紫祥;盧炳州;趙東梅;任蕊芳;吳秀萍;郝榮增;劉華南;李亞軍;吳國華;李丹;田宏;張克山;毛箬青
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/13;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58
• 代理公司: 北京力量專利代理事務所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 毛婷

本發明涉及生物技術領域，具體涉及A型口蹄疫病毒結構蛋白VP2的抗體m12、制備方法及應用。本發明篩選獲得一株高效分泌單克隆抗體的陽性雜交瘤細胞系，并獲得了一種鼠單克隆抗體m12。所述單克隆抗體m12與結構蛋白VP2特異性反應，對A型譜系代表毒株具有廣譜反應性，而不和O型譜系代表毒株反應。利用鼠單克隆抗體m12和A型結構蛋白兔抗血清建立A型口蹄疫病毒結構蛋白固相競爭ELISA檢測試劑盒，相較于現有抗體，具有更好的靈敏度和特異性，適用于A型口蹄疫感染或滅活疫苗免疫后結構蛋白抗體的檢測，同時，也是一種監測口蹄疫非免疫地區感染情況的新方法。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種A型口蹄疫病毒結構蛋白VP2的抗體m12、制備方法及應用。

背景技術

口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth?disease?virus，FMDV)感染引起的偶蹄動物共患的傳染病。FMDV屬于微核糖核酸病毒科(picornaviridae)口蹄疫病毒屬(aphthavirus)的成員，目前有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3(即南非口蹄疫病毒1、2、3型)和Asia1(亞洲1型)7個血清型。各型之間幾乎沒有免疫保護力，感染了一型口蹄疫的動物仍可感染另一型口蹄疫病毒而發病。

由于同一血清型內不同亞型的抗原性均有不同程度的差別，血清學交叉反應的程度也各有不同，使得口蹄疫的診斷和控制存在很大的難度。單克隆抗體具有識別單一抗原位點的能力，與抗原結合特異性強，均質性高，生物活性單一，易于標準化，可批量生產的特點，廣泛應用于生物醫學領域中。目前，中國主要流行O型、Asial型和A型FMD，而隨著A型FMD的流行，研發A型口蹄疫病毒單克隆抗體對于該病的診斷和預防具有重要意義。

目前關于口蹄疫血清學檢測方法有3種：病毒中和試驗(VNT)、液相阻斷ELISA(LPB-ELISA)、固相競爭ELISA(SPC-ELISA)，固相競爭ELISA方法除了具有液相阻斷ELISA方法的傳統優勢外，其特異性更好，操作更為簡單，2004年被OIE確立為口蹄疫血清學調查的最新推薦方法。但是，由于FMDV抗原結構復雜，開發廣譜且特異性針對A型口蹄疫病毒抗體檢測試劑盒，需要篩選到識別型內保守表位的特異性單克隆抗體，但目前針對A型口蹄疫病毒檢測的特異性單克隆抗體稀少，這給建立廣譜且特異性的A型FMDV抗體檢測方法帶來一定障礙。

發明內容

針對上述技術問題，本發明的目的在于提供一種A型口蹄疫病毒結構蛋白VP2的抗體、制備方法及應用，具體包括以下內容：

第一方面，本發明提供了一種A型口蹄疫病毒結構蛋白VP2的單克隆抗體m12，所述單克隆抗體m12重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示；輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

優選地，所述單克隆抗體m12為IgG2b型單克隆抗體。

第二方面，本發明提供了一種編碼上述第一方面所述單克隆抗體m12的基因片段，編碼所述單克隆抗體m12重鏈可變區的基因序列如SEQ?ID?NO.3所示，編碼所述單克隆抗體m12輕鏈可變區的基因序列如SEQ?ID?NO.4所示。

第三方面，本發明提供了一種含有上述第二方面所述的基因片段的表達載體。

第四方面，本發明提供了一種宿主細胞，所述宿主細胞含有上述第三方面所述的表達載體，或其基因組中整合有上述第二方面所述的基因片段。

第五方面，本發明提供了一種免疫偶聯物，所述免疫偶聯物包括：

(i)上述第一方面所述的單克隆抗體m12；

(ii)和選自下組的偶聯部分：可檢測標記物、藥物、金納米顆粒/納米棒、納米磁粒、病毒外殼蛋白或VLP、或其組合。

第六方面，本發明提供了一種上述第一方面所述的單克隆抗體m12在制備檢測A型口蹄疫病毒的試劑，或試紙條，或試劑盒中的應用。