[發(fā)明專利]一種人類皰疹病毒8型的引物組合物、試劑盒及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210008175.1
• 申請日: 2022-01-04
• 公開（公告）號: CN114214464A
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李論;彭海;高利芬;方治偉;萬人靜;陳利紅;李甜甜;周俊飛;肖華峰
• 申請（專利權(quán)）人: 江漢大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 河南豫龍律師事務(wù)所 41177
• 代理人: 游國戰(zhàn)

本發(fā)明公開了一種人類皰疹病毒8型的MNP分子標(biāo)記、引物對組合物、試劑盒及其應(yīng)用。所述引物包括5對引物中的至少一對，所述引物對均包括正向引物和反向引物，引物序列如SEQ ID NO.6～SEQ ID NO.15所示。所述引物特異的鑒定HHV?8的5個MNP分子標(biāo)記，是指在HHV?8基因組上篩選的區(qū)分于其他物種且在物種內(nèi)部具有多個核苷酸多態(tài)性的基因組區(qū)域。所述引物互不干擾，可一次性對多樣本的所述MNP標(biāo)記進(jìn)行序列分析，用于HHV?8的特異鑒定，遺傳變異檢測和指紋數(shù)據(jù)庫構(gòu)建；包含了所述引物的所述試劑盒對HHV?8具有免培養(yǎng)、高通量、多靶點(diǎn)、高靈敏、免培養(yǎng)的檢測優(yōu)勢，對HHV?8的科研和防疫監(jiān)測均具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明實(shí)施例涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種人類皰疹病毒8型的引物組合物、試 劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

皰疹病毒生物分類歸屬于皰疹病毒科，有分α、β、γ三個亞科，分別稱之α皰疹 病毒、β皰疹病毒和γ皰疹病毒，存在于人和動物體內(nèi)，與人類感染有關(guān)者包括:α皰疹 病毒(單純皰疹病毒、水痘-帶狀皰疹病毒)；β皰疹病毒(巨細(xì)胞病毒、人皰疹病毒6型 即HHV-6和7型即HHV-7)和γ皰疹病毒(EB病毒、人皰疹病毒8型即HHV-8)。不同亞 科的皰疹病毒感染特性不同，比如，α皰疹病毒其宿主范圍廣，復(fù)制周期短，繁殖速度快， 是一類溶細(xì)胞性感染的病毒，多潛伏在感覺神經(jīng)節(jié)內(nèi)；β皰疹病毒的宿主范圍窄，在細(xì)胞 培養(yǎng)中復(fù)制緩慢，繁殖周期長，受感染細(xì)胞變大形成巨細(xì)胞，病毒在淋巴細(xì)胞內(nèi)潛伏感染， 也可潛伏于分泌腺、腎臟或其他組織；γ皰疹病毒主要感染B淋巴細(xì)胞并長期潛伏，大多 不引起溶細(xì)胞性病變。

現(xiàn)有的篩查技術(shù)是通過鏡檢、分離培養(yǎng)、免疫學(xué)檢測或經(jīng)DNA探針進(jìn)行原位雜交，在 檢測周期、復(fù)雜度、交叉反應(yīng)、檢測變異、準(zhǔn)確性、靈敏度等方面存在一個或多個局限，病毒的分離培養(yǎng)尤其困難，現(xiàn)有技術(shù)難以特異鑒定一種皰疹病毒，因此，開發(fā)每種皰疹病毒特異的檢測技術(shù)，包括分子標(biāo)記、引物和試劑盒等，實(shí)現(xiàn)特定皰疹病毒的精準(zhǔn)特異檢測，成為亟待解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種鑒定人類皰疹病毒8型(HHV-8)的分子標(biāo)記、引物組、試劑盒 及應(yīng)用，可以對HHV-8進(jìn)行定性鑒定和變異檢測，具有高通量、高準(zhǔn)確、高特異、高靈敏的效果。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

在本發(fā)明的第二方面，提供了一種鑒定(HHV-8)的引物組合物，所述多重PCR引物組 合物包括5對引物對中的至少一對。每個MNP標(biāo)記的引物包括正向引物和反向引物。

在本發(fā)明的另一方面，提供了一種用于鑒定HHV-8試劑盒，所述試劑盒包括所述的引 物組合物。

進(jìn)一步地，所述試劑盒還包括多重PCR預(yù)混液。

又一方面，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種引物組的應(yīng)用，所述應(yīng)用包括：利用所述引物組 對HHV-8基因組上的5個MNP標(biāo)記中的至少一個進(jìn)行檢測，根據(jù)獲得的MNP標(biāo)記的序列進(jìn)行非診斷目的的HHV-8的定性鑒定、HHV-8內(nèi)部的遺傳變異鑒定、HHV-8毒株間的遺傳變異鑒定、MNP指紋數(shù)據(jù)庫的構(gòu)建，所述5個MNP標(biāo)記的序列如序列表中SEQ ID NO.1至SEQ IDNO.5所示。

MNP標(biāo)記是一種新型分子標(biāo)記，是指在基因組上一段區(qū)域內(nèi)由多個核苷酸引起的多態(tài)性 標(biāo)記。與SSR標(biāo)記和SNP標(biāo)記相比，MNP標(biāo)記具有以下優(yōu)勢：(1)等位基因豐富，單個MNP 位點(diǎn)上有2ⁿ種等位基因，高于SSR和SNP，適用于群體生物的鑒定；(2)物種區(qū)分能力強(qiáng)，只需要少量的MNP標(biāo)記就能實(shí)現(xiàn)物種鑒定，減少了檢測錯誤率。

鑒于以上優(yōu)點(diǎn)和特性，MNP標(biāo)記及檢測MNP標(biāo)記的技術(shù)可實(shí)現(xiàn)群體生物多等位基因型的 分類與溯源，在病原微生物的鑒定、指紋數(shù)據(jù)庫構(gòu)建、遺傳變異檢測等方面都具有應(yīng)用潛 力。本發(fā)明在HHV-8領(lǐng)域?qū)儆谑讋?chuàng)，并未見相關(guān)文獻(xiàn)報道；本發(fā)明實(shí)施例中的一個或多個 技術(shù)方案，至少具有如下技術(shù)效果或優(yōu)點(diǎn)：