[發明專利]一種酯型兒茶素-茶氨酸加合物的制備方法

在審

• 申請號: 202210007589.2
• 申請日: 2022-01-06
• 公開（公告）號: CN114315806A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 宛曉春;陳琪;張梁;姜宗德;王小倩;夏雨琴
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C07D405/04
• 分類號: C07D405/04;A61P3/10;A61P3/06
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 申素霞

1.一種酯型兒茶素-茶氨酸加合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

將表沒食子兒茶素沒食子酸酯、茶氨酸、pH調節劑和水混合，在密閉和加熱條件下進行親核反應，得到加合產物；

將所述加合產物與水混合，進行復溶，將所得加合產物水溶液進行萃取，得到萃取相；所述萃取所用萃取劑為乙酸乙酯或正丁醇；

將所述萃取相依次進行旋蒸濃縮和柱層析純化，得到具有式I、式II、式III和式IV所示結構的酯型兒茶素-茶氨酸加合物；

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述表沒食子兒茶素沒食子酸酯和茶氨酸的質量比為(1～20)：(20～1)；所述親核反應過程中，所述水的質量為表沒食子兒茶素沒食子酸酯和茶氨酸總質量的50～500％。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述pH調節劑為酸或堿，所述親核反應的pH值為3～10。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述加熱的溫度為60～180℃，所述親核反應的時間為10～180min。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，采用高效液相色譜對所述萃取相進行檢測，確定酯型兒茶素-茶氨酸加合物存在；所述高效液相色譜檢測所用色譜柱為AgilentZORBAX SB-Aq C18色譜柱，流動相包括A相和B相，所述A相為體積濃度0.2％的甲酸水溶液，B相為甲醇；流速為1mL/min，洗脫條件：

0～5min，5％甲酸水溶液～20％甲酸水溶液；

5～16min，20％甲酸水溶液～25％甲酸水溶液；

16～25min，25％甲酸水溶液；

25～38min，25％甲酸水溶液～45％甲酸水溶液；

38～40min，45％甲酸水溶液～100％甲醇；

40～42min，100％B相～5％甲酸水溶液；

42～55min，5％甲酸水溶液。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述柱層析純化的過程包括：

將旋蒸濃縮所得濃縮物溶解于甲醇后，將所得混合液與硅膠混合，蒸干，得到待分離樣品；

將所述待分離樣品進行第一次柱層析分離，得到第一次柱層析分離產物；

將所述第一次柱層析分離產物進行薄層色譜分離，將所得分離產物進行第二次柱層析分離，所述第二次柱層析分離包括3個洗脫梯度，得到3個洗脫組分；

采用高效液相色譜檢測法對所述3個洗脫組分進行檢測，確定酯型兒茶素-茶氨酸加合物所在組分；

將酯型兒茶素-茶氨酸加合物所在組分進行高效液相色譜分離，得到具有式I、式II、式III和式IV所示結構的酯型兒茶素-茶氨酸加合物。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述第一次柱層析分離所用填料為硅膠，洗脫試劑為二氯甲烷、甲醇和甲酸，所述二氯甲烷、甲醇和甲酸的體積比為30:10:2。

8.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述薄層色譜分離所用展開劑為二氯甲烷、甲醇和甲酸的混合溶液，所述混合溶液中甲醇、二氯甲烷和甲酸的體積比為(20～30):(8～10):(0.1～2)。

9.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述第二次柱層析分離所用填料為ODS-C18反向柱；所述第二次柱層析分離包括三個洗脫梯度，洗脫梯度1所用洗脫劑為體積濃度為0.2％的甲酸水混合液和甲醇，所述甲酸水混合液和甲醇的體積比為95:5；洗脫梯度2所用洗脫劑為體積濃度為0.2％的甲酸水混合液和甲醇，所述甲酸水溶液和甲醇的體積比為75:25；洗脫梯度3所用洗脫劑為體積濃度為0.2％的甲酸水混合液和甲醇，所述甲酸水混合液與甲醇的體積比為50:50。

10.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述高效液相色譜分離所用色譜柱為Agilent ZORBAX SB-Aq C18色譜柱，流動相包括A相和B相，所述A相為體積濃度為0.2％的甲酸水溶液，B相為甲醇；所述高效液相色譜分離的洗脫條件為：

0～4min，5％～25％甲酸水溶液；

4～7min，25％～38％甲酸水溶液；

7～9min，38％～42％甲酸水溶液；

9～17min，42％甲酸水溶液；

17～19min，42％甲酸水溶液～100％甲醇；

19～20min，100％甲醇～5％甲酸水溶液；

20～25min，5％甲酸水溶液。