[發(fā)明專利]一種塵肺病人早期篩查的mRNA檢測引物組和探針、試劑盒及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210004780.1
• 申請日: 2022-01-05
• 公開（公告）號: CN114350801B
• 公開（公告）日: 2023-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李世峰;蔡文臣;劉舒鵬;徐洪;高學(xué)敏;李耕旭;范宇杭;陳思
• 申請（專利權(quán)）人: 華北理工大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11562
• 代理人: 程小芳

1.一種塵肺病人早期篩查的mRNA的檢測引物組和探針，其特征在于，包括下列中的一種或多種：

(1)檢測KIF3A基因的mRNA表達水平的引物組和探針：上游引物序列為SEQ ID NO：1，下游引物序列為SEQ ID NO：2，探針序列為SEQ ID NO：7；

(2)檢測IFT88基因的mRNA表達水平的引物組和探針：上游引物序列為SEQ ID NO：3，下游引物序列為SEQ ID NO：4，探針序列為SEQ ID NO：8；

(3)檢測ARL13B基因的mRNA表達水平的引物組和探針：上游引物序列為SEQ ID NO：5，下游引物序列為SEQ ID NO：6，探針序列為SEQ ID NO：9。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測引物組和探針，其特征在于，所述探針的5’端和3’端分別攜帶熒光基團FAM和淬滅基團NFQ-MGB。

3.一種用于塵肺病人早期篩查的mRNA的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒包括權(quán)利要求1或2所述的檢測引物組和探針。

4.一種權(quán)利要求1或2所述的檢測引物組和探針在制備篩查早期塵肺病產(chǎn)品中的應(yīng)用。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述產(chǎn)品通過測定樣本中KIF3A和/或IFT88和/或ARL13B基因的mRNA表達水平以篩查早期塵肺病。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述產(chǎn)品包括通過熒光定量PCR來檢測KIF3A和/或IFT88和/或ARL13B基因的mRNA表達水平以篩查早期塵肺病的產(chǎn)品。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述產(chǎn)品包括以下使用方法：

步驟1：提取待測患者血清樣本中的RNA，并以正常人血清樣本為對照；

步驟2：以提取的RNA為模板，合成cDNA,利用所述的檢測引物組和探針進行熒光定量PCR，分別檢測待測患者和正常人血清樣本中KIF3A和/或IFT88和/或ARL13B基因的cDNA含量，并將所得結(jié)果進行比對；

步驟3：根據(jù)比對結(jié)果判斷待測患者是否為早期塵肺病患者。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述熒光定量PCR擴增條件為：95℃預(yù)變性30s，95℃變性10s，58℃退火30s，72℃延伸30s，進行45個循環(huán)。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述熒光定量PCR擴增體系包括：PremixEx Taq(2×)10μL、上游引物0.4μL、下游引物0.4μL、探針0.4μL、cDNA模板2μL、ROXReference Dye II(50×)0.4μL、ddH₂O6.4μL。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，若待測患者血清樣本中KIF3A和/或IFT88和/或ARL13B基因的表達水平高于對照，則判斷為早期塵肺病患者。