[發明專利]一種用于冠狀病毒釋放N蛋白的釋放劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202210003860.5
• 申請日: 2022-01-05
• 公開（公告）號: CN114019160A
• 公開（公告）日: 2022-02-08
• 發明（設計）人: 周劍輝;王敏儀
• 申請（專利權）人: 廣州科方生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288
• 代理人: 李曉陽

一種用于冠狀病毒釋放N蛋白的釋放劑及其制備方法和應用；屬于病毒檢測技術領域；包括如下按質量百分比計的組分：金屬螯合物0.01?0.1%，壬基酚聚氧乙烯醚0.8?1.2%，十六烷基三甲基溴化銨0.8?1.2%，表面活性劑0.1?0.5%，甘油0.8?1.2%，聚乙二醇6000 0.8?1.2%，NaCl溶液余量。本發明的釋放劑，克服了冠狀病毒類系列N蛋白檢測中N蛋白的釋放問題；其可有效從冠狀病毒中釋放N蛋白，提高檢測的準確性，避免假陰性導致漏篩，這對于整個冠狀病毒類的項目研究具有重要意義。

技術領域

本發明屬于病毒檢測技術領域，具體涉及一種用于冠狀病毒釋放N蛋白的釋放劑及其制備方法和應用。

背景技術

冠狀病毒是一個大型病毒家族，成熟的冠狀病毒粒子形態多樣，直徑約60-220nm，以球形為主，少數呈橢圓形或多邊形。冠狀病毒由蛋白質和RNA組成，其膜表面主要有3種結構蛋白組成：刺突蛋白（S蛋白）、包膜蛋白（E蛋白）和膜蛋白（M蛋白）；病毒里面是負責病毒繁殖的核酸物質RNA是由核衣殼蛋白（N蛋白）包裹并保護著。

目前已經發現的與人類疾病相關的冠狀病毒成員有7個，包括人冠狀病毒229E（HCoV 229E）、人冠狀病毒NL63（HCoV NL63）、人冠狀病毒OC43（HCoV OC43）、人冠狀病毒HKU1（HCoV HKU1）、嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒（SARS-CoV）、中東呼吸綜合征病毒（MERS-CoV）。其中HCoV 229E、HCoV NL63、HCoV OC43和HCoV HKU1是全球流行的病原體，可以導致普通感冒癥狀，而SARS-CoV和MERS-CoV是高致病性HCoV，可引起嚴重的急性呼吸道綜合征并且有較高的致死率。2019年出現另一種致病性HCoV，即2019年新型冠狀病毒（2019-nCoV），其感染可引起輕度、中度或重度疾病（包括重癥肺炎、膿毒血癥和ARDS等）。對冠狀病毒的進行檢測，是應對病情擴散的重要環節。

目前冠狀病毒的主要檢測方式包括：核酸檢測、抗體檢測和抗原檢測。其中，抗原檢測主要有針對S蛋白的檢測以及針對N蛋白的檢測，其中N蛋白是新冠病毒感染過程中含量最豐富的病毒結構蛋白，在病毒感染人體細胞后會大量表達，引起強烈的免疫反應。N蛋白的基因序列相對保守穩定，相比S蛋白，N蛋白上隨著時間推移產生的突變更少。因為其良好的免疫原性和穩定性，N蛋白可作為冠狀病毒的抗原檢測靶標，但是從冠狀病毒的結構中N蛋白位于囊膜內部，檢測N蛋白的難度較大；以新冠病毒（2019-nCoV）為例，其由五種成分構成：一個RNA基因鏈條和四種蛋白質。 其中最外層是刺突糖蛋白（S蛋白）， 刺突下面由小包膜糖蛋白（E蛋白） 和膜糖蛋白（M蛋白）構成的病毒包膜，該包膜里面藏著的核心是一個由RNA基因鏈條和核衣殼蛋白（N蛋白）構成的螺旋折疊結構。從結構上可知，N蛋白處于最里面，因此如果想要檢測到N蛋白，首先需要將N蛋白釋放出來。因此，怎樣將標本中的N蛋白釋放出來就成了冠狀病毒檢測中的一個難題。目前的抗原檢測手段無法有效地在冠狀病毒中釋放N蛋白，會導致檢測的準確性偏低，容易出現假陰性現象。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的之一在于提供一種用于冠狀病毒釋放N蛋白的釋放劑，其可有效從冠狀病毒中釋放N蛋白，提高檢測的準確性，降低假陰性率。

本發明的目的之二在于提供一種用于冠狀病毒釋放N蛋白的釋放劑的制備方法。

本發明的目的之三在于提供一種用于冠狀病毒釋放N蛋白的釋放劑的應用。

本發明的目的之一采用如下技術方案實現：

一種用于冠狀病毒釋放N蛋白的釋放劑，包括如下按質量百分比計的組分：

金屬螯合物 0.01-0.1%，壬基酚聚氧乙烯醚0.8-1.2%，十六烷基三甲基溴化銨0.8-1.2%，表面活性劑0.1-0.5%，甘油0.8-1.2%，聚乙二醇6000 0.8-1.2%，NaCl溶液 余量。