[發明專利]DNA分子、檢測人PTEN基因c.1026+32TG位點突變的寡核苷酸和試劑盒

在審

• 申請號: 202210002016.0
• 申請日: 2022-01-04
• 公開（公告）號: CN114381457A
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發明（設計）人: 董春燕;王淑一
• 申請（專利權）人: 杭州艾迪康醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6883;C12Q1/686
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 黃素萍;徐關壽

本發明提供了DNA分子、檢測人類PTEN基因c.1026+32TG位點突變的引物，試劑盒及其使用方法，包括用于擴增PTEN基因c.1026+32TG位點的引物；PCR反應液；本發明還提供了一種檢測人類PTEN基因c.1026+32TG位點突變試劑盒使用方法，可用于快速檢測基因PTEN c.1026+32TG位點突變，可能有助于篩選AD易感人群的分子標志物，對易感個體及其家族成員進行疾病的早期預防、早期診斷及早期治療具有重要的現實意義。

技術領域

本發明屬基因檢測技術領域，具體涉及檢測人類PTEN基因c.1026+32TG位點突變的引物、試劑盒及其使用方法。

背景技術

張力蛋白在10號染色體上同源缺失的磷酸酶(phosphatase and tensinhomologue,PTEN)基因又名MMACI/TEP1，定位于人類染色體10q23.3，約218kb，包括9個外顯子和8個內含子，其cDNA序列內包含1個由1209個核苷酸組成的開放閱讀框架，編碼403個氨基酸組成的蛋白質，是迄今為止人們發現的唯一一個具有脂質和蛋白質雙重特異性磷酸酶功能的基因。以往的研究表明PTEN具有調節細胞周期、抑制腫瘤細胞生長、抑制血管生成等功能，另外，PTEN還在胚胎的生長、發育、細胞分化、衰老等多種生理功能中起重要作用。近年來有數據表明PTEN可特異性裂解磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸(PIP3)的D3磷酸，拮抗PI3K/Akt介導的信號轉導通路，從而抑制細胞的增殖、生長和生存。除此之外，在研究PTEN在神經元功能調節以及神經系統疾病發生中的作用時，發現PTEN可調節海馬神經元Akt活性和NMDA受體功能。

阿爾茨海默病(Alzheimer’S disease，AD)是一種慢性、神經退行性疾病，且隨著年齡增長發病率逐漸增高，多發于65歲以上的老人。AD的主要發病部位是海馬、大腦皮層等，其病理特征有老年斑、神經纖維纏繞以及選擇性神經元和突觸的缺失，臨床上早期以記憶障礙和認知障礙為主要表現，晚期主要表現為精神癥狀。目前AD發病病因和發病機制尚不清楚，眾多研究認為tau蛋白在AD的發生發展中發揮著重要作用，磷酸化tau蛋白聚集在AD退行性變性神經元的胞體內，其與AD患者臨床癡呆程度相關，tau蛋白的磷酸化與PI₃K/Akt信號通路抑制有關，而PI₃K/Akt通路同AD之間又有著密切的聯系，抑制PI₃K/Akt通路可促進AD病變。也有研究表明PTEN過度表達能降低細胞內tau蛋白磷酸化，PTEN突變卻能增強tau蛋白磷酸化，PTEN通過降低ERK活性作用于tau蛋白，所以抑制PTEN的脂質磷酸酶活性可能具有對抗tau蛋白過度磷酸化而抑制或延緩AD的發生發展，表明PTEN異常表達影響tau蛋白磷酸化是AD的發病機制之一。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檢測人類PTEN基因c.1026+32TG位點突變的引物，試劑盒及其使用方法，有潛力作為篩選AD易感人群的分子標志物，對易感個體及其家族成員進行疾病的早期預防、早期診斷及早期治療具有重要的現實意義。

本發明提供了一種DNA分子，所述DNA分子的堿基序列發生c.1026+32TG位點突變。

優選地，所述DNA分子發生的突變是基于與PTEN標準序列NG_007466.2比對得出的。

優選地，所述寡核苷酸特異性地與發生人類PTEN基因c.1026+32TG位點突變的DNA分子雜交。

本發明還提供了用于檢測人類PTEN基因c.1026+32TG位點突變的寡核苷酸，其特征在于，所述寡核苷酸包括檢測人類PTEN基因c.1026+32TG位點突變的一對引物。

優選地，所述一對引物的堿基序列為：SEQ8-F：ACCATTGAAATTTATATGCCACC；

SEQ8-R：TGCTGCCGGTAAACTCCAC。

優選地，所述寡核苷酸還包括一對測序引物，所述一對測序引物的堿基序列為：