[發明專利]一種蕓薹根腫菌的接菌方法及其在篩選抗根腫病育種材料中的應用

有效

• 申請號: 202210001912.5
• 申請日: 2022-01-04
• 公開（公告）號: CN114303516B
• 公開（公告）日: 2022-12-13
• 發明（設計）人: 龐文星;閻鑫瑀;梁月;武藝璇;任信同;趙佳琦;宮曉云;朱美玉;左振楠;劉迪;張學穎
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: A01C1/00
• 分類號: A01C1/00;A01C1/02;A01H1/00
• 代理公司: 北京盛詢知識產權代理有限公司 11901
• 代理人: 張先蓉

本發明公開了一種蕓薹根腫菌的接菌方法及其在篩選抗根腫病育種材料中的應用，屬于十字花科抗病育種領域。所述接菌方法包括：催芽、催芽期管理、定植、定植后管理、發病調查、抗病性調查以及依據抗病性調查分級標準對各植株進行分級；催芽是用根腫菌懸浮液感染種子，每個培養皿中1?300粒所述種子添加所述根腫菌懸浮液2?5mL，25℃恒溫條件催芽。該接菌方法可以保證每一個植株的根系都能充分的與菌液接觸，接菌成功率達到100％；還能明顯縮短抗病性調查所需要的時間，在能保證接菌穩定性的前提下極大提高了抗病性材料篩選的效率，還為抗病抗病性材料篩選提供了新的接菌方法，縮短了抗病性材料篩選的時間，利于加快抗病育種的進程。

技術領域

本發明涉及十字花科抗病育種領域，特別是涉及一種蕓薹根腫菌的接菌方法及其在篩選抗根腫病育種材料中的應用。

背景技術

根腫病是威脅十字花科植物的一種世界性土傳病害，該病是由蕓薹根腫菌(Plasmodiophora brassicae Woronin)侵染十字花科根部，引起薄壁組織細胞大量分裂增殖且增大，進而根部逐漸形成腫瘤。根腫病專性寄生十字花科，國內主要種植的十字花科作物為大白菜，小白菜，結球甘藍，蘿卜，菜心等，根腫病的發生對十字花科作物造成非常嚴重的危害。目前，國內外對根腫病的研究越來越多，無論是抗病育種，還是根腫菌接菌方法及抗病性的鑒定。國內外已報道的接菌方法包括菌土法、灌根法、插入法、浸根法、蘸根法等，但到目前為止尚未形成一個統一、高效的十字花科作物根腫菌接菌方法。

經過前人多次的試驗驗證，以上接菌方法均有效，但是接菌效果不穩定，重復性不高，不具可比性，從而導致試驗結果及植物抗性評價等差異顯著。菌土法、注射法發病慢，浪費菌液，但發病較均勻，發病指數高；浸根法、雖操作簡單，但發病指數低。柴阿麗在十字花科根腫病接菌技術及發病條件研究使用了浸根法，發現該方法方便快捷，節省菌液用時短，效果好，發病快，但容易造成死苗。在相同的條件下用同一濃度的菌液發病率和發病指數隨處理時間的增長而加大。此外，根腫菌的接菌濃度是制約接菌成功與否的關鍵因素，濃度過低則選擇壓力達不到，侵染根部的根腫菌數達不到發病要求，而濃度過高選擇壓力過大，侵染根部的孢子數量過多，繁殖過快，使植株根部很快變成腫瘤使根部腐爛，而影響鑒定結果。發病率在一定范圍內隨接菌孢子濃度的增大而增大，但孢子濃度達到一定時發病率反而下降。

根腫病的大面積流行對國內大白菜的安全生產構成了嚴重威脅。面對國內大白菜根腫病發病區域日益擴大的嚴峻形勢，現有的生物防治、化學防治、農業防治措施，雖然可以在一定程度上減輕根腫病的危害，但同時存在土壤、環境污染，生產成本高等諸多問題，仍不能從根本上解決大白菜栽培所面臨的嚴重問題。抗病育種是防控根腫病危害最經濟且安全有效的途徑，這就需要建立一種蕓薹根腫菌穩定、高效的接菌方法及其在抗病育種材料篩技術，服務于大白菜抗病新品種的選育。加速抗病新品種的培育，減少根腫病危害地區的經濟損失，提高經濟效益。

發明內容

本發明的目的是提供一種蕓薹根腫菌的接菌方法及其在篩選抗根腫病育種材料中的應用，以解決上述現有技術存在的問題，該方法可以達到接菌成功率100％，并且還縮短了材料篩選的時間，加速了抗病育種的進程。

為實現上述目的，本發明提供了如下方案：

本發明提供一種蕓薹根腫菌的接菌方法，包括：催芽、催芽期管理、定植、定植后管理、發病調查、抗病性調查以及依據抗病性調查分級標準對各植株進行分級；

其中，所述催芽是用根腫菌懸浮液感染種子，每1-300粒所述種子添加所述根腫菌懸浮液2-5mL，25℃恒溫條件催芽。

優選的是，所述催芽的具體操作步驟包括：培養皿中放置雙層濾紙，所述濾紙用所述根腫菌懸浮液濕潤，然后在所述濾紙上放上所述種子進行催芽。

優選的是，所述種子為十字花科種子。

優選的是，所述根腫菌懸浮液濃度為1×10⁶個根腫菌休眠孢子/mL。