[發明專利]一種檢測油菜轉基因成分的引物對組合、試劑盒、檢測方法及應用

有效

• 申請號: 202210001308.2
• 申請日: 2022-01-04
• 公開（公告）號: CN114277178B
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發明（設計）人: 高利芬;彭海;陳利紅;李甜甜;周俊飛;肖華鋒;方治偉;李論;萬人靜
• 申請（專利權）人: 江漢大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 河南豫龍律師事務所 41177
• 代理人: 游國戰

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種檢測油菜轉基因成分的引物對組合、試劑盒及檢測方法。所述的檢測油菜轉基因成分的引物對組合包括用以擴增22種常用的檢測轉基因元件以及1種油菜內參基因序列HMGI/Y的引物對。本發明還涉及檢測油菜轉基因成分的試劑盒及檢測方法。本發明技術方案操作簡單，檢測效率高；檢驗對象全面，具有較高的檢測特異性、準確度和靈敏性；可用于轉基因油菜及其制品的大規模檢測，具有較好的應用前景。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種檢測油菜轉基因成分的引物對組合、試劑盒、檢測方法及應用。背景技術

轉基因油菜是全球四大轉基因作物之一，其種植面積占全球轉基因作物的5.3％。油菜在我過有很大的種植面積，是我國重要的由來作物。由于轉基因油菜在我國還沒有商業化種植，為了滿足食用油和菜粕的用量，我國每年需要進口大量的油菜籽用作加工原料。然而大量的轉基因產涌入市場，其環境及安全問題開始引起人們的重視，因此，開發高效、便捷的轉基因食品檢測技術顯得至關重要。

轉基因產品的檢測技術主要包括基于蛋白的檢測方法和基于核酸的檢測方法。目前基于核酸的PCR檢測方法仍是目前最普遍、最準確的轉基因檢測技術，其主要包括普通定性PCR、巢式PCR、環介導等溫擴增技術(LAMP)、熒光定量PCR多重PCR等方法。相對于普通定性PCR方法，巢式PCR高了檢測的靈敏度，容易造成假陽性。LAMP操作簡單、特異性強，然而引物設計較為復雜，容易造成DNA污染，影響后續的實驗。熒光定量PCR方法具有重復性好、靈敏度高、核酸交叉污染少的優點，但其成本高，并且需要特殊檢測儀器。普通的多重PCR方法可以在一個反應中同時檢測多個基因，但一般不超過6重，否則引物之間干擾較大，影響檢測效果。基因芯片和數字PCR技術也是常用的轉基因產品檢測技術，它們均具有高通量、靈敏度高、特異性強等優點，且可平行檢測1個轉基因作物中多個基因或同時檢測多種轉基因作物；然而其成本高昂，需要專門的儀器設備，要求操作人員具有較高的專業素質，這些因素限制了該技術在檢測中的廣泛應用。

因此研發一種高效、靈敏和通量高的轉基因產品檢測方法，成為亟待解決的關鍵問題。

發明內容

本申請實施例的技術方案為解決上述技術問題，總體思路如下：

篩選常用的油菜轉基因產品檢測元件核苷酸序列即靶標分子及內參基因作為檢測目標。包括22種檢測常用的轉基因元件：p35S、t35S、pNOS、pFMV35S、tNOS、tPINⅡ、pRBCS4、tE9、t7s、PAT、bar、NPtII、GOX、pTsf1、pTA29、Barnase、barstar、tOCS、tg7、AtRbcs-transit-peptide、cp4epsps和pAtUbiQuittin10，以及包括1油菜內參基因的序列HMGI/Y。

接著，本發明開發了用于檢測所述的轉基因元件和油菜內參基因的多重PCR引物組合物，其中22對針對22種轉基因元件，2對針對兩個內參基因。所述引物互相間不沖突，可以通過多重PCR進行高效的擴增。所述多重PCR引物組合物可以用于開發轉基因元件檢測試劑盒。

具體的技術方案為，第一方面，本申請提供了一種檢測油菜轉基因成分引物對組合，所述的引物對組合包括編號為BnGMO1、BnGMO2、BnGMO3、BnGMO4、BnGMO5、BnGMO6、BnGMO7、BnGMO8、BnGMO9、BnGMO10、BnGMO11、BnGMO12、BnGMO13、BnGMO14、BnGMO15、BnGMO16、BnGMO17、BnGMO18、BnGMO19、BnGMO20、BnGMO21、BnGMO22的22對引物，每對引物由正向引物和反向引物組成，具體的引物對組合核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1-SEQ?ID?NO.44所示。

還提供了包括用于擴增油菜內參基因HMGI/Y的編號為BnGMO23、BnGMO24兩對引物對組合，每對引物由正向引物和反向引物組成，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.45-SEQ?IDNO.48所示。