[發(fā)明專利]靶向?qū)嶓w瘤的多重工程改造的iPSC和免疫效應(yīng)細(xì)胞

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202180077027.9
• 申請日: 2021-11-04
• 公開（公告）號: CN116615530A
• 公開（公告）日: 2023-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: B·瓦拉馬爾;李彤;楊璧卉;M·普里巴迪;張家偉
• 申請（專利權(quán)）人: 菲特治療公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 北京同立鈞成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11205
• 代理人: 李艷;黃健

1.一種細(xì)胞或其群體，其中所述細(xì)胞是真核細(xì)胞、動物細(xì)胞、人細(xì)胞、免疫細(xì)胞、誘導(dǎo)多能細(xì)胞(iPSC)、克隆iPSC或由其分化的衍生細(xì)胞，并且其中所述細(xì)胞包含：

(i)編碼轉(zhuǎn)基因TCRα鏈(tgTCRα)的多核苷酸；和

(ii)編碼轉(zhuǎn)基因TCRβ鏈(tgTCRβ)的多核苷酸，其中所述tgTCRα鏈和所述tgTCRβ鏈形成識別第一腫瘤抗原的外源TCR復(fù)合體(TCR^exo)；以及任選地，

(iii)一種或多種另外的外源多核苷酸，所述一種或多種另外的外源多核苷酸包含編碼至少靶向第二腫瘤抗原的嵌合抗原受體(CAR)或銜接子的多核苷酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)胞或其群體，其中：

(i)編碼所述tgTCRα鏈的所述多核苷酸和編碼所述tgTCRβ鏈的所述多核苷酸包含在雙順反子構(gòu)建體中，并且任選地其中：

(a)將所述構(gòu)建體插入在TCRα或TCRβ(TRAC或TRBC)的恒定區(qū)處；

(b)所述構(gòu)建體的所述插入破壞了內(nèi)源TCRα或TCRβ在所述插入位點(diǎn)處的表達(dá)；和/或

(c)所述構(gòu)建體的表達(dá)由TCR的內(nèi)源啟動子或外源啟動子驅(qū)動；或者

(ii)將編碼所述CAR或所述銜接子的所述多核苷酸插入在TRAC或TRBC處，并且任選地其中：

(a)編碼所述CAR或所述銜接子的所述多核苷酸的所述插入破壞了所述內(nèi)源TCRα或TCRβ在所述插入位點(diǎn)處的表達(dá)；和/或

(b)所述CAR或所述銜接子的表達(dá)由TCR的內(nèi)源啟動子或外源啟動子驅(qū)動；或者

(iii)將編碼所述tgTCRα鏈和所述tgTCRβ鏈、所述CAR或所述銜接子的所述多核苷酸或者所述一種或多種另外的多核苷酸插入在一個(gè)或多個(gè)安全港基因座或所選基因座中。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的細(xì)胞或其群體，(I)其中將所述構(gòu)建體以及編碼所述CAR或所述銜接子的所述多核苷酸各自插入在TCRα或TCRβ(TRAC或TRBC)的恒定區(qū)處，但不插入在同一恒定區(qū)處，從而破壞內(nèi)源TCRα和TCRβ兩者的表達(dá)，敲除所述內(nèi)源TCR，并避免錯(cuò)配的TCR，包含：

(a)所述轉(zhuǎn)基因TCRα和所述內(nèi)源TCRβ，或者

(b)所述轉(zhuǎn)基因TCRβ和所述內(nèi)源TCRα；

或者(II)其中所述構(gòu)建體以及編碼所述CAR或所述銜接子的所述多核苷酸各自整合在包含安全港基因座或所選基因座的基因座處。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的細(xì)胞或其群體，其中：

(i)所述安全港基因座包括AAVS1、CCR5、ROSA26、膠原蛋白、HTRP、H11、GAPDH或RUNX1中的至少一者；

(ii)所選基因座是B2M、TAP1、TAP2、TAP相關(guān)蛋白、NLRC5、CIITA、RFXANK、RFX5、RFXAP、TCR、NKG2A、NKG2D、CD38、CD25、CD69、CD44、CD58、CD54、CD56、CD69、CD71、CIS、CBL-B、SOCS2、PD1、CTLA4、LAG3、TIM3或TIGIT中的一者；和/或

(iii)所述外源多核苷酸的所述整合敲除了所述基因座中的所述基因的表達(dá)。