[發明專利]枯草桿菌中的病毒載體質粒生產

在審

• 申請號: 202180074481.9
• 申請日: 2021-11-02
• 公開（公告）號: CN116438310A
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 齋藤俊介;柘植謙爾
• 申請（專利權）人: 株式會社辛普羅根
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 楊宏軍;周莎

1.制作病毒載體質粒的方法，所述方法包括下述步驟：

步驟A)，將包含用于生產病毒載體的核酸序列的核酸導入宿主細胞中，在所述宿主細胞中形成質粒；和

步驟B)，將包含所述質粒的宿主細胞配置于所述質粒進行擴增的條件下。

2.制作病毒載體質粒的方法，所述病毒載體質粒具有能在枯草桿菌內被復制的序列，所述方法包括下述步驟：

將包含具有能在枯草桿菌內被復制的序列的、用于生產病毒載體的核酸序列的核酸導入宿主細胞中，在所述宿主細胞中形成質粒。

3.制作病毒載體質粒的方法，所述病毒載體質粒具有能在枯草桿菌內被復制的序列，所述方法包括下述步驟：

將包含所述質粒的宿主細胞配置于所述質粒進行擴增的條件下。

4.如權利要求1所述的方法，其中，將所述核酸導入所述宿主細胞中的步驟包括使感受態的所述宿主細胞與所述核酸接觸。

5.如權利要求1、2或4所述的方法，其中，所述核酸為具有串聯重復的核酸序列的非環狀核酸。

6.如權利要求1～5中任一項所述的方法，其中，所述核酸或質粒包含所期望的基因的核酸序列。

7.如權利要求1～6中任一項所述的方法，其還包括將2～120個單位核酸集聚從而制作所述核酸的步驟。

8.如權利要求7所述的方法，其還包括將5～80個單位核酸集聚從而制作所述核酸的步驟。

9.如權利要求7所述的方法，其還包括將10～60個單位核酸集聚從而制作所述核酸的步驟。

10.如權利要求1～9中任一項所述的方法，其中，所述病毒為選自由α病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、流行性感冒病毒、水皰性口炎病毒、冠狀病毒、辛德畢斯病毒、塞姆利基森林病毒、單純皰疹病毒、逆轉錄病毒、慢病毒、狂犬病病毒、仙臺病毒、腺相關病毒、腺病毒、呼腸弧病毒、柯薩奇病毒、及新城疫病毒組成的組中的病毒。

11.如權利要求10所述的方法，其中，所述病毒為腺相關病毒、腺病毒、逆轉錄病毒、慢病毒、單純皰疹病毒、或仙臺病毒。

12.如權利要求10所述的方法，其中，所述病毒為腺相關病毒或慢病毒。

13.如權利要求10所述的方法，其中，所述病毒為腺相關病毒。

14.如權利要求1～13中任一項所述的方法，其中，所述質粒不包含所述病毒的全基因組中的至少一部分基因的序列。

15.如權利要求1～14中任一項所述的方法，其中，所述質粒包含至少一種核酸，所述至少一種核酸包含：

在枯草桿菌中促進質粒復制的核酸序列；和

構成病毒所必需的核酸序列。

16.如權利要求15所述的方法，其中，所述構成病毒所必需的核酸序列為約10kb以上。

17.如權利要求15或16所述的方法，其中，所述構成病毒所必需的核酸序列包含所述病毒的2個末端重復序列及其他部分，所述其他部分位于被所述2個末端重復序列夾持的區域之外。

18.如權利要求15～17中任一項所述的方法，其中，所述構成病毒所必需的核酸序列包含：

編碼所述病毒的衣殼蛋白的核酸序列；

編碼對所述病毒的基因組進行包裝、轉錄及復制的蛋白質的核酸序列；

所述病毒的2個末端重復序列；和

輔助基因。