[發明專利]包含經基因修飾的測試微生物的生物指示器

在審

• 申請號: 202180052667.4
• 申請日: 2021-08-19
• 公開（公告）號: CN116194158A
• 公開（公告）日: 2023-05-30
• 發明（設計）人: 喬舒亞·D·埃里克森;納倫德拉納斯·博基沙姆;托尼亞?D?博尼利亞;戴明華
• 申請（專利權）人: 3M創新有限公司
• 主分類號: A61L2/28
• 分類號: A61L2/28
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司 11219
• 代理人: 金海霞;劉慧

1.一種用于評估滅菌過程的功效的制品，所述制品包括：

殼體，所述殼體具有形成通向隔室的開口的至少一個壁；

設置在所述殼體中的多個經基因修飾的測試微生物，所述多個經基因修飾的測試微生物中的每一個經基因修飾的測試微生物包含產孢子的經基因修飾的測試微生物；

其中所述經基因修飾的測試微生物包含編碼非天然存在的嵌合蛋白的功能性融合基因，所述嵌合蛋白包含第一區段和與所述第一區段鄰接的第二區段；

其中所述第一區段包含正常存在于孢子中的第一多肽的至少一部分；

其中所述第二區段包含具有可檢測酶活性的第二多肽；

液體培養基，所述液體培養基設置在可打開容器中，所述可打開容器設置在所述殼體中或附接到所述殼體；以及

酶底物，所述酶底物能夠與所述可檢測酶活性反應以形成可檢測產物，所述酶底物設置在所述殼體中或所述可打開容器中。

2.根據權利要求1所述的制品，其中所述第一多肽選自小酸溶性孢子蛋白、孢子外殼蛋白和孢子形成相關GTP結合蛋白。

3.根據權利要求2所述的制品，其中所述第一多肽由選自ysxE、yutH、cotE、cotF、cotH、cotS、cotF、gerE、sspA、sspB、sspD和sspE的基因編碼。

4.根據前述權利要求中的任一項所述的制品，其中所述第二多肽具有選自酯酶、脂肪酶、糖苷酶、氨基肽酶和磷酸酶以及螢光素酶的酶活性。

5.根據權利要求4所述的制品，其中所述第二多肽具有選自以下的酶活性：β-D-半乳糖苷酶；β-D-葡糖苷酶；α-D-葡糖苷酶；堿性磷酸酶；酸性磷酸酶；丁酸酯酶；辛酸酯酶；氯霉素乙酰轉移酶；兒茶酚-2,3-雙加氧酶；肉豆蔻酸脂肪酶；亮氨酸氨基肽酶；纈氨酸氨基肽酶；胰凝乳蛋白酶；磷酸水解酶；α-D-半乳糖苷酶；α-L-阿拉伯呋喃糖酶；N-乙酰基-β-氨基葡糖苷酶；β-D-纖維二糖苷酶；丙氨酸氨基肽酶；脯氨酸氨基肽酶；酪氨酸氨基肽酶；苯丙氨酸氨基肽酶；β-D-葡糖醛酸酶和脂肪酸酯酶。

6.根據前述權利要求中的任一項所述的制品，其中所述第一區段包含所述第一多肽的N-末端區域。

7.根據前述權利要求中的任一項所述的制品，其中所述功能性融合基因包括控制所述第一多肽的表達的至少一個調控序列。

8.根據前述權利要求中的任一項所述的制品，其中所述經基因修飾的測試微生物屬于選自以下的屬：芽孢桿菌屬(Bacillus)、地芽孢桿菌屬(Geobacillus)、梭菌屬(Clostridium)以及前述屬中的任何兩者或更多者的組合。

9.根據前述權利要求中的任一項所述的制品，其中所述液體培養基包含溶解和/或懸浮于其中的酶底物。

10.根據前述權利要求中的任一項所述的制品，其中所述正常存在于孢子中的第一多肽的至少一部分包含構成所述第一多肽的不少于1％的氨基酸殘基的第一多肽區段。

11.根據前述權利要求中的任一項所述的制品，其中所述融合基因在所述經基因修飾的測試微生物中設置在染色體外復制子中。

12.根據權利要求1至10中的任一項所述的制品，其中所述融合基因在所述經基因修飾的測試微生物中設置在染色體復制子中。