[發(fā)明專利]通過(guò)靶向MAPT基因治療阿爾茨海默病的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202180047093.1
• 申請(qǐng)日: 2021-07-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115867652A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-03-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 伊恩·羅伯特·湯普生;山形哲也;塔爾哈·阿克布盧特
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 摩大力斯醫(yī)療株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C12N15/09
• 分類號(hào): C12N15/09
• 代理公司: 中原信達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11219
• 代理人: 楊青;郭翠霞

1.一種多核苷酸，所述多核苷酸包含以下堿基序列：

(a)編碼核酸酶缺陷型CRISPR效應(yīng)蛋白與轉(zhuǎn)錄阻遏因子的融合蛋白的堿基序列，和

(b)編碼指導(dǎo)RNA的堿基序列，所述指導(dǎo)RNA靶向人類MAPT基因的表達(dá)調(diào)控區(qū)中以SEQID NO:54、55、56、57、68、153或97所示的區(qū)域中長(zhǎng)度為18至24個(gè)核苷酸的連續(xù)區(qū)域。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多核苷酸，其中所述編碼指導(dǎo)RNA的堿基序列包含以SEQ IDNO:54、55、56、57、68、153或97所示的堿基序列，或其中1至3個(gè)堿基被缺失、替換、插入和/或添加的以SEQ IDNO:54、55、56、57、68、153或97所示的堿基序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的多核苷酸，所述多核苷酸包含至少兩個(gè)不同的編碼指導(dǎo)RNA的堿基序列。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中所述轉(zhuǎn)錄阻遏因子選自KRAB、MeCP2、SIN3A、HDT1、MBD2B、NIPP1和HP1A。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的多核苷酸，其中所述轉(zhuǎn)錄阻遏因子是KRAB。

6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中所述核酸酶缺陷型CRISPR效應(yīng)蛋白是dCas9。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的多核苷酸，其中所述dCas9來(lái)源于金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。

8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，所述多核苷酸還包含用于所述編碼指導(dǎo)RNA的堿基序列的啟動(dòng)子序列和/或用于所述編碼核酸酶缺陷型CRISPR效應(yīng)蛋白與轉(zhuǎn)錄阻遏因子的融合蛋白的堿基序列的啟動(dòng)子序列。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的多核苷酸，其中用于所述編碼指導(dǎo)RNA的堿基序列的啟動(dòng)子序列選自U6啟動(dòng)子、SNR6啟動(dòng)子、SNR52啟動(dòng)子、SCR1啟動(dòng)子、RPR1啟動(dòng)子、U3啟動(dòng)子和H1啟動(dòng)子。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的多核苷酸，其中用于所述編碼指導(dǎo)RNA的堿基序列的啟動(dòng)子序列是U6啟動(dòng)子。

11.根據(jù)權(quán)利要求8至10中任一項(xiàng)所述的多核苷酸，其中用于所述編碼核酸酶缺陷型CRISPR效應(yīng)蛋白與轉(zhuǎn)錄阻遏因子的融合蛋白的堿基序列的啟動(dòng)子序列是廣泛性啟動(dòng)子或神經(jīng)元特異性啟動(dòng)子。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的多核苷酸，其中所述廣泛性啟動(dòng)子選自EFS啟動(dòng)子、CMV啟動(dòng)子和CAG啟動(dòng)子。

13.一種載體，所述載體包含根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)所述的多核苷酸。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的載體，其中所述載體是質(zhì)粒載體或病毒載體。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的載體，其中所述病毒載體選自腺相關(guān)病毒(AAV)載體、腺病毒載體和慢病毒載體。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的載體，其中所述AAV載體選自AAV1、AAV2、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、Anc80、AAV₅₈₇MTP、AAV₅₈₈MTP、AAV-B1、AAVM41和AAVrh74。

17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的載體，其中所述AAV載體是AAV9。

18.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)所述的多核苷酸或根據(jù)權(quán)利要求13至17中任一項(xiàng)所述的載體。