[發(fā)明專利]改性HDL的定量方法以及用于該定量方法的分析用試劑

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202180037523.1
• 申請(qǐng)日: 2021-03-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115698713A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-02-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 澤村達(dá)也;垣野明美
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 國(guó)立大學(xué)法人信州大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/53
• 分類號(hào): G01N33/53;C07K14/745;G01N33/543;G01N33/92
• 代理公司: 深圳中一聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44414
• 代理人: 張禹

本發(fā)明提供一種改性HDL的定量方法，其為試樣中所含的改性HDL的定量方法，其中，使所述改性HDL與改性HDL結(jié)合蛋白結(jié)合，對(duì)所述改性HDL結(jié)合蛋白與所述改性HDL的結(jié)合體進(jìn)行定量，所述改性HDL結(jié)合蛋白包含具有因子V的L鏈部位的序列的蛋白質(zhì)或其突變體。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及能夠用于生活習(xí)慣病風(fēng)險(xiǎn)及其治愈效果的判定的改性HDL的定量方法以及用于該定量方法的分析用試劑。

背景技術(shù)

HDL(High-Density Lipoprotein，高密度脂蛋白)是所謂的膽固醇的一種，比重高、粒徑小。已知HDL負(fù)責(zé)從組織向肝臟的膽固醇的輸送。若HDL在血中濃度較高，則使動(dòng)脈硬化的風(fēng)險(xiǎn)降低，因此有時(shí)也通稱為“有益膽固醇”。另一方面，比重低的LDL(Low-DensityLipoprotein，低密度脂蛋白)作為“有害膽固醇”而已知。HDL和LDL的濃度被用作健康診斷的指標(biāo)。

作為HDL的生理活性，不僅抑制LDL的氧化，而且通過(guò)NO的增加等減輕由氧化LDL引起的細(xì)胞毒性，發(fā)揮抗動(dòng)脈硬化效果。但是，在冠狀動(dòng)脈疾病患者中，血中改性HDL增加，其經(jīng)由LOX-1作用于血管，促進(jìn)動(dòng)脈硬化，在人的動(dòng)脈硬化灶中，作為HDL的載脂蛋白的ApoAI改性而成的物質(zhì)大量蓄積。由于這些結(jié)果，為了將HDL用作健康診斷的指標(biāo)，不僅需要測(cè)定HDL的濃度，還需要分別對(duì)具有本來(lái)的生理活性的HDL和由于改性等而活性發(fā)生了變化的HDL進(jìn)行定量。尤其是，認(rèn)為如果能夠?qū)Ω男訦DL進(jìn)行定量，則能夠用于包含上述冠狀動(dòng)脈疾病在內(nèi)的、與循環(huán)系統(tǒng)以及血液相關(guān)的疾病及其風(fēng)險(xiǎn)的驗(yàn)證。

專利文獻(xiàn)1公開(kāi)了一種功能障礙HDL的測(cè)定方法，其為試樣中所含的功能障礙HDL的測(cè)定方法，其中，使試樣與功能障礙HDL的受體接觸，使試樣中的功能障礙HDL與受體結(jié)合，并對(duì)與受體結(jié)合的功能障礙HDL進(jìn)行檢測(cè)，受體為L(zhǎng)OX-1或其變體，受體固定化于載體，使對(duì)功能障礙HDL進(jìn)行識(shí)別的抗體進(jìn)一步與結(jié)合于受體的功能障礙HDL結(jié)合。該技術(shù)試圖提供一種能夠廣泛檢測(cè)多種分子形態(tài)的功能障礙HDL的功能障礙HDL測(cè)定技術(shù)，并且提供利用了該技術(shù)的生活習(xí)慣病的檢測(cè)技術(shù)。

另外，本發(fā)明的發(fā)明人在專利文獻(xiàn)2中公開(kāi)了在與LOX-1結(jié)合的LOX-1結(jié)合蛋白序列上直接或經(jīng)由間隔物連結(jié)有ApoA1的全部蛋白序列或部分片段蛋白序列的融合蛋白以及使用了該融合蛋白的高密度脂蛋白的測(cè)定試劑盒。該技術(shù)通過(guò)測(cè)定由LOX-1和抗ApoA1抗體同時(shí)識(shí)別的HDL，能夠測(cè)定接受了各種改性的HDL，以及使用如針對(duì)LOX-1的抗體(抗LOX-1抗體)的LOX-1結(jié)合部位等那樣使與LOX-1特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和ApoA1融合而成的融合蛋白。通過(guò)該融合蛋白，能夠同時(shí)識(shí)別接受了各種改性的HDL，用于測(cè)定受體結(jié)合活性并測(cè)定生理活性本身，因此想要得到不含脂質(zhì)、能夠長(zhǎng)期保存、能夠再現(xiàn)性地進(jìn)行調(diào)整、能夠降低各個(gè)測(cè)定試驗(yàn)間的偏差而提高可靠性的可成為參考的融合蛋白。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)1：日本特許第6231307號(hào)公報(bào)

專利文獻(xiàn)2：日本特愿2018-024007

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明所要解決的問(wèn)題

改性HDL在理論上在實(shí)驗(yàn)室中可以通過(guò)專利文獻(xiàn)1中記載的技術(shù)進(jìn)行定量。本發(fā)明的發(fā)明人的專利文獻(xiàn)2的技術(shù)與現(xiàn)有技術(shù)相比進(jìn)一步精煉。可以預(yù)想到，應(yīng)用這些方法，容易建立即使不是充分精煉也能夠用于改性HDL的定量的方法。

然而，現(xiàn)狀是專利文獻(xiàn)1的技術(shù)也沒(méi)有達(dá)到普及。進(jìn)一步地，即使使用本發(fā)明的發(fā)明人的專利文獻(xiàn)2的技術(shù)，使用實(shí)驗(yàn)室以外的條件、不同的檢體實(shí)施時(shí)，有時(shí)改性HDL的定量結(jié)果也不是恒定的。上述差異除了實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的條件以外，還考慮了實(shí)施技術(shù)的人的試驗(yàn)技術(shù)的差異等各種因素。

本發(fā)明的發(fā)明人考慮到上述的歷史經(jīng)過(guò)和在臨床的實(shí)際應(yīng)用中即使條件稍差也應(yīng)該能夠進(jìn)行測(cè)定，以將改性HDL的定量技術(shù)改良為更具有通用性的定量技術(shù)為目標(biāo)進(jìn)行了深入研究。