[發(fā)明專(zhuān)利]用于人脂肪基質(zhì)細(xì)胞臨床生長(zhǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)基的人血清

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111672961.3
• 申請(qǐng)日: 2015-12-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114317409A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邁克爾·莫勒
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 邁克爾·莫勒
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/071
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/071;C12N5/0775
• 代理公司: 上海申新律師事務(wù)所 31272
• 代理人: 董科

本發(fā)明涉及一種用于人類(lèi)臨床和治療應(yīng)用的用于人脂肪基質(zhì)細(xì)胞臨床生長(zhǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)基。

相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用

本申請(qǐng)要求于2014年12月31日提交的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)No.62/098799的優(yōu)先權(quán)，其全部?jī)?nèi)容并入本文。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于人類(lèi)臨床和治療應(yīng)用的用于人脂肪基質(zhì)細(xì)胞的臨床生長(zhǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)基。

背景技術(shù)

脂肪來(lái)源的干細(xì)胞，實(shí)際上，所有間充質(zhì)干細(xì)胞被推測(cè)為血管周?chē)募?xì)胞，這意味著它們?cè)诒榧叭梭w的血管附近生長(zhǎng)。這可能表明ADSCs和MSCs習(xí)慣于“血性的”，富含血清的環(huán)境。據(jù)推測(cè)添加人血清將為這些細(xì)胞創(chuàng)造更自然的培養(yǎng)基。用全部人血清替代HAS(人血清白蛋白)也將大大降低培養(yǎng)基成本。

現(xiàn)如今仍需要基于人體血清且商業(yè)上可行的干細(xì)胞培養(yǎng)基，以用于人脂肪基質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)。

發(fā)明內(nèi)容

在第一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明涉及一種用于人類(lèi)臨床和治療應(yīng)用的用于人脂肪基質(zhì)細(xì)胞的臨床生長(zhǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基包括適合于哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基；不用抗凝血?jiǎng)┦占以谘逄幚砬霸试S血清凝塊的人體血清；且包含(i)生長(zhǎng)促進(jìn)量的人胰島素，(ii)人轉(zhuǎn)鐵蛋白，(iii)人重組表皮生長(zhǎng)因子，(iv)人重組血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB，(v)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF2)和(vii)酚紅中的至少一種；其中所述培養(yǎng)基不含亞油酸。

在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明涉及一種制備用于人類(lèi)臨床和治療應(yīng)用的的用于人脂肪基質(zhì)細(xì)胞的臨床生長(zhǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)基的方法，包括以下步驟：將適合于哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基的成分進(jìn)行組合；不用抗凝劑收集人血清，并在血清處理前允許其凝塊；且包含(i)生長(zhǎng)促進(jìn)量的人胰島素，(ii)人轉(zhuǎn)鐵蛋白，(iii)人重組表皮生長(zhǎng)因子，(iv)人重組血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB，(v)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF2)和(vii)酚紅中的至少一種；其中所述培養(yǎng)基不含亞油酸。

具體實(shí)施方式

此處使用某些術(shù)語(yǔ)只是為了方便起見(jiàn)，并不是為了對(duì)本發(fā)明產(chǎn)生限制作用。所述術(shù)語(yǔ)包括特指的詞，以及它們的衍生詞和類(lèi)似的外來(lái)詞。本文討論的實(shí)施例做不到全面詳盡，也不會(huì)將本發(fā)明限制為本發(fā)明所述的準(zhǔn)確形式。選擇和以這種方式描述實(shí)施例都只是為了最好地解釋該發(fā)明的原理，應(yīng)用及實(shí)際運(yùn)用，同時(shí)使該領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠最好地利用本發(fā)明。

脂肪來(lái)源的干細(xì)胞及所有間充質(zhì)干細(xì)胞被推測(cè)為血管周?chē)募?xì)胞，這意味著它們?cè)诒榧叭梭w的血管附近生長(zhǎng)。這可能表明ADSCs和MSCs習(xí)慣于“血性的”，富含血清的環(huán)境。本發(fā)明提供的細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中添加了人血清，人血清為這些細(xì)胞生長(zhǎng)創(chuàng)造了一個(gè)更天然的培養(yǎng)基，同時(shí)還大大降低了培養(yǎng)基的成本。

通常，血液都是通過(guò)在抗凝血?jiǎng)┐嬖诘那闆r被收集，如EDTA或檸檬酸鈉。因此，從該血液產(chǎn)生的“常規(guī)”血清可想而知具有所有正常凝血因子和與凝血相關(guān)的結(jié)構(gòu)蛋白。這意味著，在正常血清中生長(zhǎng)的細(xì)胞，可想到的是，最后都會(huì)覆蓋凝血因子，所述凝血因子會(huì)導(dǎo)致在移植后的血液凝塊。“脫落凝塊”血清在不含抗凝血?jiǎng)┑那闆r下被收集，其在血清處理前可允許凝塊。因此凝血因子將不在其中。

使用人體血清的基本想法是利用以下原則：(i)MSCs(包括ADSCs)位于血管周?chē)馕吨鼈冊(cè)诒榧叭梭w的血管附近生長(zhǎng)。事實(shí)上，毛細(xì)血管所處的位置含有內(nèi)皮細(xì)胞，所述內(nèi)皮細(xì)胞上排列著毛細(xì)血管，并且MSCs直接位于內(nèi)皮細(xì)胞的外面，這意味著，在整個(gè)生命過(guò)程中，MSCs將在血清存在的情況下存在，并且只存在于血清中。本領(lǐng)域的技術(shù)人員理解“合成培養(yǎng)基”的概念，例如所有物質(zhì)都按已知的比例和數(shù)量進(jìn)行添加。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到自然環(huán)境對(duì)于生長(zhǎng)和維持這些細(xì)胞是最佳的。