[發明專利]一種蛇婆子子葉愈傷組織的誘導方法

有效

• 申請號: 202111672908.3
• 申請日: 2021-12-31
• 公開（公告）號: CN114208678B
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 孫然鋒;尹豐滿;胡展;謝佳
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 海南漢普知識產權代理有限公司 46003
• 代理人: 劉建芳

本發明公開一種蛇婆子子葉愈傷組織的誘導方法，包括以下步驟：取外植體，在0.5～2.0mg/L 2，4?D的第一培養基上進行培養，得到松散型愈傷組織；將松散型愈傷組織轉接到含有0.05～0.4mg/Lα?萘乙酸的第二培養基上進行培養，即獲得含有喹啉酮類生物堿的愈傷組織。該誘導方法能夠快速得到含有大量喹啉酮類生物堿的愈傷組織，愈傷組織誘導率達到85～93.4％，喹啉酮類生物堿含量達到0.6μg/g。

技術領域

本發明屬于植物組培技術領域，具體涉及一種蛇婆子子葉愈傷組織的誘導方法。

背景技術

蛇婆子(Waltheria indica L.Sterculiaceae)屬于梧桐科(Sterculiaceae)蛇婆子屬Waltheria)，是一種略直立或匍匐狀半灌木，廣泛分布于非洲、南美和東南亞等熱帶和亞熱帶地區。主要分布于福建、臺灣、廣東、海南、廣西、云南等地。研究發現蛇婆子含黃酮類化合物、生物堿和萜類等60多種化合物。蛇婆子具抗炎、抗菌、抗錐蟲病、抗癌等作用。另外，其次生代謝物waltherione A具有抗根結線蟲活性，具有很強農用活性。

愈傷組織是組織培養最常見的一種培養形式，愈傷組織是原指植物體的局部受到創傷刺激后，在傷口表面新生的組織。它由活的薄壁細胞組成，可起源于植物體任何器官內各種組織的活細胞。愈傷組織培養具有多種用途，一方面可研究植物生長發育及分化的機制進行基因遺傳轉化，對植物遺傳育種具有特殊意義；另一方面可用于大規模工廠化生產有用化合物，或用于細胞培養篩選工業、農業、醫藥生產上有用的無性系，或用于原生質體培養中的原生質體來源等。實踐證明，愈傷組織培養不僅是一種植物快繁的新手段，同時也是植物改良、種質保存和有用化合物生產的理想途徑。

在蛇婆子的正常生長發育過程中，喹諾酮類生物堿主要集中在莖中，其產生量難以滿足日益增長的藥用需求，因此利用組培技術建立愈傷體系從而產生大量的次生代謝物質已成為研究熱點。然而在植物組織中喹諾酮類生物堿的含量相對較低。建立高效的蛇婆子組織培養快速繁殖系統能夠有效地解決喹諾酮類生物堿的自然資源短缺問題。然而現有蛇婆子組織培養技術還處于起步階段，有關蛇婆子組織培養的報道很少，還存在蛇婆子愈傷組織的誘導率低、愈傷組織質量較差、活性物質含量較低等問題，嚴重制約了蛇婆子組織培養快速繁殖的研究進展。因此，建立高效的誘導蛇婆子外植體形成愈傷組織的組培體系，對加速蛇婆子育種及提高喹諾酮類生物堿含量都具有重要意義。

發明內容

鑒于現有技術的不足，本發明提供一種蛇婆子子葉愈傷組織的誘導方法。

本發明技術方案主要包括以下內容：

一種蛇婆子子葉愈傷組織的誘導方法，包括以下步驟：

取外植體，在0.5～2.0mg/L 2，4-D的第一培養基上進行培養，得到松散型愈傷組織；將松散型愈傷組織轉接到含有0.05～0.4mg/Lα-萘乙酸的第二培養基上進行培養，即獲得含有喹啉酮生物堿Waltherione A的愈傷組織。

優選的，所述外植體包括蛇婆子葉片。本發明實施例中采用的是生長40-50d的蛇婆子子葉。

優選的，在第一培養基上培養的時間是5周。

優選的，在第二培養基上培養的時間是至少15d。

優選的，所述第一培養基為在基礎培養基中添加6-BA、α-萘乙酸和0.5～2.0mg/L2，4-D。

優選的，所述第二培養基為在基礎培養基中添加NAA、蔗糖和0.05～0.4mg/Lα-萘乙酸。

更優選的，所述第一培養基為在基礎培養基中添加1.0mg/L 6-BA、0.2mg/Lα-萘乙酸和1.0mg/L 2，4-D。

更優選的，所述第二培養基為在基礎培養基中添加0.1～0.2mg/Lα-萘乙酸、0.1mg/L NAA和30g/L蔗糖。