[發明專利]一種檢測microRNA的方法和試劑在審
| 申請號： | 202111644739.2 | 申請日： | 2021-12-30 |
| 公開（公告）號： | CN114196738A | 公開（公告）日： | 2022-03-18 |
| 發明（設計）人： | 丁佳女;鄭宜文;沈青青 | 申請（專利權）人： | 杭州百邁生物股份有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6848 | 分類號： | C12Q1/6848;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 311228 浙江省杭州市杭州大江東*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 microrna 方法 試劑 | ||
1.檢測microRNA的試劑，包括用于連接反應的連接引物和用于擴增反應的擴增引物，其特征在于，所述連接引物包括一條線性引物和一條莖環引物，所述擴增引物是microRNA經連接反應后生產的cDNA設計。
2.根據權利要求1所述的試劑，其特征在于，所述線性引物包括一段Poly(A)尾結構序列以及一段與所述靶標microRNA的3’端雜交的序列組成。
3.根據權利要求1所述的試劑，其特征在于，所述莖環引物包括一段與靶標microRNA的5’端雜交的序列及莖環結構序列組成，莖環引物的5’端進行磷酸化修飾；靠近5’端的堿基點為連接點。
4.根據權利要求1所述的試劑，其特征在于，其中一條擴增引物是在線性引物的基礎上去掉Poly(A)結構，并隨機增加五個堿基。
5.根據權利要求1所述的試劑，其特征在于，還包括探針。
6.一種檢測microRNA的方法，包括以下步驟：
(1)樣本處理，捕獲作為反應模板的靶RNA；
(2)將反應試劑加入至PCR反應管中，所述反應試劑包括連接引物和擴增引物；
(3)向PCR反應管中加入步驟1中處理好的模板；
(4)啟動連接擴增一步法反應程序；
(5)反應結束，進行結果分析；
其中所述的連接引物和擴增引物選自權利要求1至5之一所述的試劑。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟1包括向樣本內加入磁珠，混勻，棄上清，得到模板。
8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR反應為實時熒光PCR。
9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述反應試劑還包括探針。
10.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述一步法反應程序包括37℃，15min，循環1次；95℃，5min，循環1次；95℃，15s，60℃，35s，循環40次。
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