[發明專利]一種雙菌菌劑及在荒漠化土壤修復的應用

有效

• 申請號: 202111640376.5
• 申請日: 2021-12-29
• 公開（公告）號: CN114214249B
• 公開（公告）日: 2023-08-15
• 發明（設計）人: 郭麗莉;劉亞茹;高艷麗;李書鵬;王祺;熊靜;郝弟;李嘉晨
• 申請（專利權）人: 北京建工環境修復股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C09K17/14;B09C1/10;C12R1/07;C12R1/01;C09K105/00
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 張丹錫

1.一種荒漠化土壤修復方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1：將雙菌菌劑與待修復土壤混合靜置，得到第一混合土壤；

S2：向第一混合土壤中加入固定液，混合后得到第二混合土壤；

S3：向第二混合土壤中加入膠結液，混合后得到第三混合土壤；

S4：將步驟S1-S3重復進行1-5次，得到修復后土壤；

所述雙菌菌劑為將碳酸鹽礦化菌和產碳酸酐酶菌分別發酵得到菌液，然后將菌液混合均勻獲得，所述雙菌菌劑中碳酸鹽礦化菌和產碳酸酐酶菌的活菌比為1-5：1；

所述碳酸鹽礦化菌為巴斯德芽孢桿菌，來源為美國菌種保藏中心，編號ATCC?11859；

所述產碳酸酐酶菌為工程菌E-22b-IRLS；

步驟S2中所述固定液為氯化鈣溶液，濃度為0.01M～0.05M；

步驟S3中所述膠結液為氯化鈣和尿素的混合溶液，所述氯化鈣和尿素的摩爾濃度相同，為0.5M～1.5M；

步驟S1中，所述雙菌菌劑和待修復土壤的體積比為1-1.5:1，靜置時間為2-5h；

步驟S2中，所述固定液和待修復土壤的體積比為0.1-0.3:1；

步驟S3中，所述膠結液和待修復土壤的體積比為5-10:1。

2.根據權利要求1所述的土壤修復方法，其特征在于，所述碳酸鹽礦化菌的培養方法為，挑取碳酸鹽礦化菌單菌落至第一培養基，置于25-35℃200-250rpm條件下過夜培養活化菌體，得到過夜培養物；吸取過夜培養物加入其體積100-200倍的第一培養基中，再于25-35℃200-250rpm下培養24h，得到碳酸鹽礦化菌菌液。

3.根據權利要求2所述的土壤修復方法，其特征在于，所述產碳酸酐酶菌的培養方法為，挑取產碳酸酐酶菌單菌落至第二培養基，置于25-35℃200-250rpm條件下過夜培養活化菌體，得到過夜培養物；吸取過夜培養物加入其體積100-200倍的第二培養基中，再于25-35℃200-250rpm下培養24h，得到產碳酸酐酶菌菌液。

4.根據權利要求3所述的土壤修復方法，其特征在于，所述第一培養基每升含酵母提取物20g、硫酸銨10g、Tris?15.748g，用稀鹽酸調整pH至9；

所述第二培養基每升含蛋白胨10g、酵母粉5g、氯化鈉10g。

5.根據權利要求4所述的土壤修復方法，其特征在于，使用第一培養基將碳酸鹽礦化菌菌液稀釋至OD₆₀₀＝1，使用第二培養基將產碳酸酐酶菌菌液稀釋至OD₆₀₀＝1，然后將碳酸鹽礦化菌菌液和產碳酸酐酶菌菌液的按體積比為1-5：1混合均勻。