[發(fā)明專利]一種脂質(zhì)體包裹蛋白酶的生產(chǎn)工藝

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202111640307.4
• 申請日: 2021-12-30
• 公開（公告）號: CN114209819A
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫波
• 申請（專利權(quán)）人: 山東源科生物科技股份有限公司
• 主分類號: A61K38/48
• 分類號: A61K38/48;A61K9/127;A61P39/06;A61P35/00;A61P29/00;A61P7/02;A61P3/10;A61P3/04;A61P27/02;A61K31/7048
• 代理公司: 濟南格源知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37306
• 代理人: 張蕾

本發(fā)明屬于蛋白酶技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種脂質(zhì)體包裹蛋白酶的生產(chǎn)工藝，包括以下工藝步驟：將膜材溶于有機溶劑中，經(jīng)減壓蒸發(fā)去除有機溶劑，形成脂質(zhì)薄膜；將蛋白酶溶解在溶劑中得到蛋白酶溶液；向脂質(zhì)薄膜中加入蛋白酶溶液，溶解脂質(zhì)薄膜，冰浴超聲，得到脂質(zhì)體?蛋白酶溶液；用微孔濾膜過濾，得到包裹蛋白酶的脂質(zhì)體。本發(fā)明利用脂質(zhì)體包裹蛋白酶，將蛋白酶與外界環(huán)境隔開，保護其不受環(huán)境條件影響，防止其氧化變質(zhì)，延長其活性時間，增加了蛋白酶的穩(wěn)定性，且脂質(zhì)體可通過胞吞或膜融合等方式將蛋白酶轉(zhuǎn)入細胞內(nèi)，能有效解決其作為生物大分子難以透過細胞膜的難題，可大大提高其作用效果和利用率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于蛋白酶技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種脂質(zhì)體包裹蛋白酶的生產(chǎn)工藝。

背景技術(shù)

蛋白酶是生物體內(nèi)的一類酵素，是水解蛋白質(zhì)肽鍵的一類酶的總稱，它們能夠有效分解蛋白質(zhì)，分解方法是打斷那些將氨基酸連結(jié)成多肽鏈的肽鍵。按其水解多肽的方式，可以將其分為內(nèi)肽酶和外肽酶兩類。內(nèi)肽酶將蛋白質(zhì)分子內(nèi)部切斷，形成分子量較小的月示和胨。外肽酶從蛋白質(zhì)分子的游離氨基或羧基的末端逐個將肽鍵水解，而游離出氨基酸，前者為氨基肽酶后者為羧基肽酶。按其活性中心和最適pH值，又可將蛋白酶分為絲氨酸蛋白酶、巰基蛋白酶、金屬蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶。按其反應(yīng)的最適pH值，分為酸性蛋白酶、中性蛋白酶和堿性蛋白酶。工業(yè)生產(chǎn)上應(yīng)用的蛋白酶，主要是內(nèi)肽酶。蛋白酶廣泛存在于動物內(nèi)臟、植物莖葉、果實和微生物中。微生物蛋白酶，主要由霉菌、細菌，其次由酵母、放線菌生產(chǎn)。

由于蛋白酶對環(huán)境條件敏感，容易氧化變質(zhì)，造成應(yīng)用上的缺陷。脂質(zhì)體是由磷脂雙分子層形成的內(nèi)部包含水相的封閉囊泡，具有緩釋性、細胞親和性、組織相容性等優(yōu)點，已成功應(yīng)用于醫(yī)藥、化工、化妝品等領(lǐng)域中。因此，研究出一種脂質(zhì)體包裹蛋白酶的生產(chǎn)工藝，以提高蛋白酶的穩(wěn)定性和生物利用性，是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟待解決的技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了一種脂質(zhì)體包裹蛋白酶的生產(chǎn)工藝。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種脂質(zhì)體包裹蛋白酶的生產(chǎn)工藝，包括以下工藝步驟：

（1）將膜材溶于有機溶劑中，經(jīng)減壓蒸發(fā)去除有機溶劑，形成脂質(zhì)薄膜；

（2）將蛋白酶溶解在溶劑中得到蛋白酶溶液；

（3）向脂質(zhì)薄膜中加入蛋白酶溶液，溶解脂質(zhì)薄膜，冰浴超聲，得到脂質(zhì)體-蛋白酶溶液；

（4）用微孔濾膜過濾，得到包裹蛋白酶的脂質(zhì)體。

優(yōu)選的，步驟（1）中，所述膜材包括膽固醇和卵磷脂，所述膽固醇和卵磷脂的重量比為1∶2～1∶6。

優(yōu)選的，步驟（1）中，所述的有機溶劑中膜材濃度為4.0～5.5mg/mL；所述減壓蒸發(fā)的溫度為50～70℃。

優(yōu)選的，步驟（1）中，所述有機溶劑包括無水乙醇、無水乙醚、乙醇和氯仿中的一種或多種的組合。

優(yōu)選的，步驟（2）中，所述溶劑為磷酸鹽緩沖溶液，PH值為6.0～7.0。

優(yōu)選的，步驟（2）中，所述蛋白酶溶液中蛋白酶的濃度為0.5～1.5mg/ml。

優(yōu)選的，步驟（4）中，所述脂質(zhì)體的直徑為50～200nm。

優(yōu)選的，步驟（4）中，得到包裹蛋白酶的脂質(zhì)體后，再用花色苷進行包覆，得到花色苷包覆的蛋白酶脂質(zhì)體。

花色苷是花色素與糖以糖苷鍵結(jié)合而成的一類化合物，廣泛存在于植物的花、果實、莖、葉和根器官的細胞液中，研究證明花色苷具有清除體內(nèi)自由基、增殖葉黃素、抗腫瘤、抗癌、抗炎、抑制脂質(zhì)過氧化和血小板凝集、預(yù)防糖尿病、減肥、保護視力等功效。通過花色苷進行包覆，可以充分利用花色苷的特性，賦予蛋白酶脂質(zhì)體新的功能。